上市品種“康復新液”的藥學再評價.pdf

1、消化性潰瘍(peptic ulcer，PU)是常見病、多發(fā)病，積極防治尤為重要?？祻托乱簽槊乐薮篌?Periplaneta americaana(L.)提取制成的單方制劑,臨床上通過口服主要用于消化性潰瘍的治療。
　　本文基于古代本草知識，從臨床有效性出發(fā)，圍繞康復新液生產(chǎn)工藝內外物質的抗消化性潰瘍藥效差異、工藝內藥效物質基礎及相關機理、質量評價，多方面、多學科結合、多層次開展上市品種“康復新液”藥學再評價的系統(tǒng)研究，以期為康復新

2、液臨床使用的安全性、有效性及其“二次開發(fā)”提供理論依據(jù)和技術支撐。
　　1、工藝再評價
　　以實際生產(chǎn)工藝為核心，采用藥效（大鼠幽門結扎型胃潰瘍模型與水浸應激型胃潰瘍模型）和化學成分分析相結合的方法，對康復新液現(xiàn)有工藝的科學合理性進行再評價。研究結果表明：現(xiàn)有工藝除去特殊腥臭氣味的油脂不僅無防治消化性潰瘍作用，反而加重潰瘍的程度；工藝外未被提取出的粗多糖及蛋白質也未顯示出抗消化性潰瘍的活性；抗消化性潰瘍活性成分仍集中于康復新

3、液。從而初步闡明康復新液原料美洲大蠊發(fā)揮抗消化性潰瘍的活性物質與油脂、多糖、大分子量的蛋白質無關，現(xiàn)有康復新液生產(chǎn)工藝具有一定的科學合理性。
　　2、康復新液中間體各洗脫物的成分分析與藥效評價
　　根據(jù)康復新液中間體成分疏水性強弱的不同，采用大孔吸附樹脂對其進行梯度洗脫，分離制得水洗脫物、25％乙醇洗脫物、50%乙醇洗脫物及75%乙醇洗脫物四個部位，結合化學與藥效（水應激型胃潰瘍模型）實驗對康復新液中間體各洗脫物進行活性追蹤

4、及成分分析。結果：康復新液中間體經(jīng)分離后，水洗脫物不僅未發(fā)揮防治消化性潰瘍作用，反而加重潰瘍的程度，提示水洗脫物中的氨基酸類、糖類、復合核苷堿基類成分及表皮生長因子與抗消化性潰瘍作用關系不大；25%乙醇洗脫物有防治消化性潰瘍趨勢；50%乙醇洗脫物有較好的防治潰瘍作用；75%乙醇洗脫物防治潰瘍的藥效最顯著，且藥效較純化之前更佳，表明康復新液抗消化性潰瘍的活性物質主要集中在75%乙醇洗脫物中，且多肽類成分純度高達90%，從而提示康復新液抗消

5、化性潰瘍作用主要與多肽類成分有關。
　　3、藥效機制
　　采用酶聯(lián)免疫法(Elisa法)檢測血清中5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)的含量；采用免疫組織化學技術檢測胃組織中熱休克蛋白（HSPs）、H+/K+-ATP酶、前列腺素(PGE2)、表皮生長因子(EGF)的數(shù)量，探索康復新液及各洗脫物抗?jié)冏饔玫臋C制。結果：在應激性潰瘍中，HSPs及 EGF未體現(xiàn)保護胃組織作用。水洗脫物不僅不能抗?jié)冏饔?，?/p>

6、而增加潰瘍面的形成并有炎癥發(fā)生，與未能抑制H+/K+-ATP酶活性并刺激PGE2炎癥介質的釋放有關?？祻托乱嚎?jié)冏饔檬峭ㄟ^抑制5-HT、NE的釋放及 H+/K+-ATP酶活性并通過抑制 PGE2的合成有關；25%乙醇洗脫物有抗?jié)冏饔泌厔?，與其能夠抑制5-HT、NE等有關；50%乙醇洗脫物抗?jié)冃Ч^穩(wěn)定，與其能夠抑制5-HT、NE分泌及對 PGE2的抑制作用相對較強有關；75%乙醇洗脫物抗?jié)冏饔米顬轱@著并有明顯的抗炎作用，除了與該

7、部位能夠抑制5-HT、NE的分泌有關外，更與其能夠顯著抑制H+/K+-ATP酶活性而抑制胃酸分泌，及抑制PGE2的合成減少炎癥發(fā)生和促進DA含量升高等綜合因素發(fā)揮明顯的抗?jié)冏饔?。同時各洗脫物抗?jié)兊乃幮а芯拷Y果具有可重復性。
　　4、康復新液中間體75%乙醇洗脫物的成分結構鑒定研究
　　利用氣質聯(lián)用儀對75%乙醇洗脫物進行成分分析，研究結果提示除油脂是康復新液生產(chǎn)過程及制備75%乙醇洗脫物的關鍵環(huán)節(jié)，除油脂不完全，將會殘留

8、相對百分含量較高的具有細胞毒作用的棕櫚酸；同時大孔樹脂中的有毒物質未殘留于75%乙醇洗脫物中，可安全使用。采用基質輔助激光解析/離子化-飛行時間質譜（MALDI- TOF- MS）測定75%乙醇洗脫物肽類成分的分子量，結果分子量分布在500-3300之間，m/z520.34響應最高為主要物質，另外還存在m/z1348.7432， m/z1943.0382等多種含量較少的多肽成分。
　　5、康復新液及其原料藥材的質量再評價模式

9、>　　采用HPLC方法，建立了前處理簡單、信息量豐富的康復新液及原料藥美洲大蠊藥材的指紋圖譜，并對藥材、制劑進行整體性評價，結果：來源于科倫藥業(yè)及荷花池市場的美洲大蠊藥材與云南各基地生產(chǎn)美洲大蠊藥材指紋圖譜有一定差異；美洲大蠊藥材與黑胸大蠊的特征峰有差異，可作為鑒別依據(jù)；A藥業(yè)生產(chǎn)的10批康復新液除個別批號外，其他均較為均一、穩(wěn)定。
　　在建立藥材及制劑指紋圖譜的基礎上結合藥效研究結果，將具有加重潰瘍的水洗脫物的指紋圖譜與10批美

10、洲大蠊藥材及康復新液指紋圖譜的共有模式進行比較分析，得出水洗脫物與藥材及制劑共有峰，將這些共有峰剔除后再次對藥材及制劑HPLC指紋圖譜進行相似度評價及共有峰的聚類分析，并以本文研究所用具有抗?jié)冏饔玫目苽愃帢I(yè)美洲大蠊藥材及批號為M1204122康復新液為參照。結果顯示，荷花池美洲大蠊單獨歸為一類，科倫藥業(yè)美洲大蠊與云南各基地的藥材歸為一類，提示除來源于荷花池美洲大蠊藥材外，其他藥材在抗?jié)兎矫婢哂休^好的一致性；10批A藥業(yè)生產(chǎn)的康復新液

11、雖歸為2類，但批號為M1204122康復新液與其他批次間的相似度及相關系數(shù)非常高，表明A藥業(yè)生產(chǎn)的康復新液抗?jié)冏饔幂^為穩(wěn)定。
　　采用電導率、表面張力、滲透壓、粘度等參數(shù)對康復新液進行測定，從物理性質角度對康復新液進行再評價。研究結果表明，康復新液的質量也較為穩(wěn)定。
　　綜上所述，康復新液抗消化性潰瘍的物質基礎及作用機理已較為明確，探討了基于剔除無效部位成分峰的指紋圖譜評價模式及理化參數(shù)表征的質量再評價模式，為質量評價提供