上市品種“康復(fù)新液”的藥學(xué)再評價.pdf

1、消化性潰瘍(peptic ulcer，PU)是常見病、多發(fā)病，積極防治尤為重要?？祻?fù)新液為美洲大蠊 Periplaneta americaana(L.)提取制成的單方制劑,臨床上通過口服主要用于消化性潰瘍的治療。
　　本文基于古代本草知識，從臨床有效性出發(fā)，圍繞康復(fù)新液生產(chǎn)工藝內(nèi)外物質(zhì)的抗消化性潰瘍藥效差異、工藝內(nèi)藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及相關(guān)機理、質(zhì)量評價，多方面、多學(xué)科結(jié)合、多層次開展上市品種“康復(fù)新液”藥學(xué)再評價的系統(tǒng)研究，以期為康復(fù)新

2、液臨床使用的安全性、有效性及其“二次開發(fā)”提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。
　　1、工藝再評價
　　以實際生產(chǎn)工藝為核心，采用藥效（大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍模型與水浸應(yīng)激型胃潰瘍模型）和化學(xué)成分分析相結(jié)合的方法，對康復(fù)新液現(xiàn)有工藝的科學(xué)合理性進行再評價。研究結(jié)果表明：現(xiàn)有工藝除去特殊腥臭氣味的油脂不僅無防治消化性潰瘍作用，反而加重潰瘍的程度；工藝外未被提取出的粗多糖及蛋白質(zhì)也未顯示出抗消化性潰瘍的活性；抗消化性潰瘍活性成分仍集中于康復(fù)新

3、液。從而初步闡明康復(fù)新液原料美洲大蠊發(fā)揮抗消化性潰瘍的活性物質(zhì)與油脂、多糖、大分子量的蛋白質(zhì)無關(guān)，現(xiàn)有康復(fù)新液生產(chǎn)工藝具有一定的科學(xué)合理性。
　　2、康復(fù)新液中間體各洗脫物的成分分析與藥效評價
　　根據(jù)康復(fù)新液中間體成分疏水性強弱的不同，采用大孔吸附樹脂對其進行梯度洗脫，分離制得水洗脫物、25％乙醇洗脫物、50%乙醇洗脫物及75%乙醇洗脫物四個部位，結(jié)合化學(xué)與藥效（水應(yīng)激型胃潰瘍模型）實驗對康復(fù)新液中間體各洗脫物進行活性追蹤

4、及成分分析。結(jié)果：康復(fù)新液中間體經(jīng)分離后，水洗脫物不僅未發(fā)揮防治消化性潰瘍作用，反而加重潰瘍的程度，提示水洗脫物中的氨基酸類、糖類、復(fù)合核苷堿基類成分及表皮生長因子與抗消化性潰瘍作用關(guān)系不大；25%乙醇洗脫物有防治消化性潰瘍趨勢；50%乙醇洗脫物有較好的防治潰瘍作用；75%乙醇洗脫物防治潰瘍的藥效最顯著，且藥效較純化之前更佳，表明康復(fù)新液抗消化性潰瘍的活性物質(zhì)主要集中在75%乙醇洗脫物中，且多肽類成分純度高達90%，從而提示康復(fù)新液抗消

5、化性潰瘍作用主要與多肽類成分有關(guān)。
　　3、藥效機制
　　采用酶聯(lián)免疫法(Elisa法)檢測血清中5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)的含量；采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測胃組織中熱休克蛋白（HSPs）、H+/K+-ATP酶、前列腺素(PGE2)、表皮生長因子(EGF)的數(shù)量，探索康復(fù)新液及各洗脫物抗?jié)冏饔玫臋C制。結(jié)果：在應(yīng)激性潰瘍中，HSPs及 EGF未體現(xiàn)保護胃組織作用。水洗脫物不僅不能抗?jié)冏饔?，?/p>

6、而增加潰瘍面的形成并有炎癥發(fā)生，與未能抑制H+/K+-ATP酶活性并刺激PGE2炎癥介質(zhì)的釋放有關(guān)?？祻?fù)新液抗?jié)冏饔檬峭ㄟ^抑制5-HT、NE的釋放及 H+/K+-ATP酶活性并通過抑制 PGE2的合成有關(guān)；25%乙醇洗脫物有抗?jié)冏饔泌厔?，與其能夠抑制5-HT、NE等有關(guān)；50%乙醇洗脫物抗?jié)冃Ч^穩(wěn)定，與其能夠抑制5-HT、NE分泌及對 PGE2的抑制作用相對較強有關(guān)；75%乙醇洗脫物抗?jié)冏饔米顬轱@著并有明顯的抗炎作用，除了與該

7、部位能夠抑制5-HT、NE的分泌有關(guān)外，更與其能夠顯著抑制H+/K+-ATP酶活性而抑制胃酸分泌，及抑制PGE2的合成減少炎癥發(fā)生和促進DA含量升高等綜合因素發(fā)揮明顯的抗?jié)冏饔?。同時各洗脫物抗?jié)兊乃幮а芯拷Y(jié)果具有可重復(fù)性。
　　4、康復(fù)新液中間體75%乙醇洗脫物的成分結(jié)構(gòu)鑒定研究
　　利用氣質(zhì)聯(lián)用儀對75%乙醇洗脫物進行成分分析，研究結(jié)果提示除油脂是康復(fù)新液生產(chǎn)過程及制備75%乙醇洗脫物的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，除油脂不完全，將會殘留

8、相對百分含量較高的具有細胞毒作用的棕櫚酸；同時大孔樹脂中的有毒物質(zhì)未殘留于75%乙醇洗脫物中，可安全使用。采用基質(zhì)輔助激光解析/離子化-飛行時間質(zhì)譜（MALDI- TOF- MS）測定75%乙醇洗脫物肽類成分的分子量，結(jié)果分子量分布在500-3300之間，m/z520.34響應(yīng)最高為主要物質(zhì)，另外還存在m/z1348.7432， m/z1943.0382等多種含量較少的多肽成分。
　　5、康復(fù)新液及其原料藥材的質(zhì)量再評價模式

9、>　　采用HPLC方法，建立了前處理簡單、信息量豐富的康復(fù)新液及原料藥美洲大蠊藥材的指紋圖譜，并對藥材、制劑進行整體性評價，結(jié)果：來源于科倫藥業(yè)及荷花池市場的美洲大蠊藥材與云南各基地生產(chǎn)美洲大蠊藥材指紋圖譜有一定差異；美洲大蠊藥材與黑胸大蠊的特征峰有差異，可作為鑒別依據(jù)；A藥業(yè)生產(chǎn)的10批康復(fù)新液除個別批號外，其他均較為均一、穩(wěn)定。
　　在建立藥材及制劑指紋圖譜的基礎(chǔ)上結(jié)合藥效研究結(jié)果，將具有加重潰瘍的水洗脫物的指紋圖譜與10批美

10、洲大蠊藥材及康復(fù)新液指紋圖譜的共有模式進行比較分析，得出水洗脫物與藥材及制劑共有峰，將這些共有峰剔除后再次對藥材及制劑HPLC指紋圖譜進行相似度評價及共有峰的聚類分析，并以本文研究所用具有抗?jié)冏饔玫目苽愃帢I(yè)美洲大蠊藥材及批號為M1204122康復(fù)新液為參照。結(jié)果顯示，荷花池美洲大蠊單獨歸為一類，科倫藥業(yè)美洲大蠊與云南各基地的藥材歸為一類，提示除來源于荷花池美洲大蠊藥材外，其他藥材在抗?jié)兎矫婢哂休^好的一致性；10批A藥業(yè)生產(chǎn)的康復(fù)新液

11、雖歸為2類，但批號為M1204122康復(fù)新液與其他批次間的相似度及相關(guān)系數(shù)非常高，表明A藥業(yè)生產(chǎn)的康復(fù)新液抗?jié)冏饔幂^為穩(wěn)定。
　　采用電導(dǎo)率、表面張力、滲透壓、粘度等參數(shù)對康復(fù)新液進行測定，從物理性質(zhì)角度對康復(fù)新液進行再評價。研究結(jié)果表明，康復(fù)新液的質(zhì)量也較為穩(wěn)定。
　　綜上所述，康復(fù)新液抗消化性潰瘍的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機理已較為明確，探討了基于剔除無效部位成分峰的指紋圖譜評價模式及理化參數(shù)表征的質(zhì)量再評價模式，為質(zhì)量評價提供