遼寧絨山羊新基因DCN生物學(xué)功能的研究.pdf

1、遼寧絨山羊是我國(guó)特有的，其產(chǎn)絨量高，品種優(yōu)質(zhì)，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此研究遼寧絨山羊絨毛品質(zhì)相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)和功能對(duì)其發(fā)展有重要的作用。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建了遼寧絨山羊毛囊興盛期cDNA質(zhì)粒文庫(kù)，測(cè)通分離出一條遼寧絨山羊新的全長(zhǎng)cDNA序列為核心蛋白聚糖基因(Decorin，DCN)。本文首先用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)DCN基因的結(jié)構(gòu)和組成。為進(jìn)一步研究DCN基因的表達(dá)情況，我們利用RT-PCR檢測(cè)DCN基因在皮膚及各內(nèi)臟組織中是否表達(dá)

2、;運(yùn)用原位雜交技術(shù)對(duì)DCN基因在皮膚中進(jìn)行定位分析;采用Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè)DCN基因在遼寧絨山羊各時(shí)期初次級(jí)毛囊中的相對(duì)表達(dá)量。另外，本論文還研究了運(yùn)用干擾Noggin基因的慢病毒感染羊皮膚細(xì)胞后，熒光定量檢測(cè)DCN基因的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)生物信息學(xué)分析顯示:DCN基因的全長(zhǎng)為1271bp，編碼的蛋白質(zhì)含有360個(gè)氨基酸，為親水性、穩(wěn)定性蛋白。遼寧絨山羊DCN基因與綿羊、牛DCN基因的同源性較高

3、。DCN有信號(hào)肽的表達(dá)，但不存在跨膜結(jié)構(gòu)域，并最有可能定位在細(xì)胞外。
　　(2) RT-PCR結(jié)果顯示:DCN基因在皮膚、心臟、脾臟中顯著表達(dá)，在腎臟中少量表達(dá)，在肝臟和肺臟中幾乎不表達(dá)。
　　(3)原位雜交結(jié)果顯示:DCN基因在遼寧絨山羊的初級(jí)毛囊和次級(jí)毛囊的內(nèi)根鞘有強(qiáng)烈的信號(hào)，同時(shí)在細(xì)胞周圍也有強(qiáng)烈的表達(dá)信號(hào)。
　　(4) Real-Time PCR結(jié)果顯示:DCN基因興盛期次級(jí)毛囊的表達(dá)量約為初級(jí)毛囊的2.69倍

4、(P＜0.05)，而退行期初級(jí)毛囊的表達(dá)量約為次級(jí)毛囊的3.75倍(P＜0.01)。由于休止期無(wú)法分辨初次級(jí)毛囊，DCN基因在皮膚毛囊的表達(dá)量約為β-Actin基因的5.58倍。
　　(5)干擾Noggin基因的慢病毒感染遼寧絨山羊皮膚細(xì)胞后，抑制了Noggin基因，BMP通路被激活，DCN基因的相對(duì)表達(dá)量約減少了0.12倍，呈下調(diào)趨勢(shì)。
　　通過(guò)以上結(jié)果我們可以得出:(1)核心蛋白聚糖基因(DCN)在皮膚、心臟、脾臟中表達(dá)