多巴胺D5受體對去甲腎上腺素誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞肥大的影響.pdf

1、一、研究目的：
　　目前缺乏特異的D1、D5受體激動劑和拮抗劑,尚不能確定D1類受體對心肌肥大的影響是經(jīng)由D1或D5受體發(fā)揮作用的。因而,本實(shí)驗(yàn)采用多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam干預(yù)由去甲腎上腺素(NE)誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞肥大,并以反義核苷酸技術(shù)抑制D5受體的表達(dá),從基因表達(dá)、細(xì)胞蛋白合成速率等角度探討多巴胺D5受體在心肌肥大中的作用,為心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展提供依據(jù)。
　　二、研究內(nèi)容：
　　1.用不同濃度的

2、NE作用于H9C2細(xì)胞,觀察NE對H9C2細(xì)胞肥大的促進(jìn)作用。
　　2.用不同濃度的多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam作用于H9C2細(xì)胞,觀察fenoldopam對H9C2細(xì)胞本身有無作用。
　　3.觀察NE與fenoldopam同時存在的情況下,H9C2細(xì)胞的肥大作用有無發(fā)生改變,如果H9C2細(xì)胞的肥大作用發(fā)生改變,那么多巴胺D1類受體激動劑是否通過D5對NE促H9C2細(xì)胞的肥大作用產(chǎn)生影響。
　　4.觀察D

3、5反義核苷酸抑制D5受體的表達(dá),由此來判斷多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam對NE誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞肥大作用是否通過D5受體發(fā)揮作用。
　　三、研究方法：
　　采用[3H]-亮氨酸摻入法測定細(xì)胞蛋白含量及RT-PCR檢測ANF的mRNA表達(dá)的水平作為檢測心肌肥大的標(biāo)志,以及利用RT-PCR的方法檢測多巴胺D5反義核苷酸處理后,D5mRNA的改變。
　　四、研究結(jié)果：
　　1.NE作用H9C2細(xì)胞48h,在1

4、0-9～10-6mol/L范圍內(nèi),可顯著促進(jìn)細(xì)胞蛋白合成,呈濃度依賴性對H9C2細(xì)胞的促肥大作用。
　　2.多巴胺D1類受體激動劑fenoldopam本身對H9C2細(xì)胞并無促肥大作用。但在fenoldopam與NE同時存在的情況下,NE對H9C2細(xì)胞促肥大作用則被抑制。
　　3.多巴胺D5反義核苷酸抑制D5受體的表達(dá)。
　　4.多巴胺D5反義核苷酸阻斷了fenoldopam對NE促H9C2細(xì)胞肥大的抑制作用。