鹵地菊中對映貝殼杉型二萜衍生物的抗腫瘤作用.pdf

1、目的：對鹵地菊中對映貝殼杉型二萜成分進行結(jié)構(gòu)修飾，并對修飾后的衍生物進行體內(nèi)外抗腫瘤作用的研究及其機制的初步探討，以期發(fā)現(xiàn)活性高、毒副作用小的先導(dǎo)化合物。
　　方法：（1）選擇含量高的對映-貝殼杉-16-烯-19-酸（W1）化合物進行結(jié)構(gòu)修飾，向分子中引入α-環(huán)外亞甲基環(huán)戊酮基團，對C-4位羧基引入酰胺基團。（2）分別用MTT和SRB法檢測15-羰基-對映-貝殼杉-16-烯-19-丁酰胺化合物（W1-6）對2株白血病細胞和6株貼壁

2、生長腫瘤細胞的體外增殖作用；選擇結(jié)腸癌SW480細胞，用吖啶橙染色觀察藥物作用后的細胞形態(tài)；分別用PI單染法和Anne xin V-FITC/PI雙染法檢測W1-6對細胞周期和凋亡的影響；Western-blot檢測W1-6對細胞內(nèi)Bcl-2及Caspase-3蛋白表達的影響。（3）應(yīng)用小鼠移植瘤U14模型，觀察W1-6的體內(nèi)抗腫瘤活性。
　　結(jié)果：（1）W1結(jié)構(gòu)改造后，合成了具有α-亞甲基酮結(jié)構(gòu)的新型對映貝殼杉二萜化合物W1-6

3、：15-羰基-對映-貝殼杉-16-烯-19-丁酰胺。（2）體外試驗結(jié)果顯示，W1-6對8株腫瘤細胞具有顯著的濃度依賴性抑制增殖作用，IC50值均在0.88 mg·L-1以內(nèi)。（3）動物試驗結(jié)果顯示，W1-6對U14移植瘤的增長有一定的抑制作用，在劑量為30、15、7.5 mg·(kg·d)-1時，抑制率分別為35.07％、10.23%和28.62%。（4）對結(jié)腸癌SW480細胞的試驗結(jié)果顯示，W1-6對細胞的抑制作用呈明顯的濃度依賴性和

4、時間依賴性。作用24、48、72 h的IC50分別為0.86、0.40和0.19 mg·L-1。（5）細胞周期分析顯示，SW480細胞經(jīng)W1-6作用24 h后，細胞被阻滯在S期，在濃度0、0.25、0.5、1.00 mg·L-1時，S期細胞由陰性對照組的27.92%分別提高至37.92%、47.65%和52.91%。各給藥濃度組與對照組比較具有顯著的差異性（P<0.01）。（6）吖啶橙染色結(jié)果顯示，經(jīng)W1-6作用后的SW480細胞數(shù)目減

5、少，可見綠色碎片顆粒，核染色質(zhì)濃縮，并形成凋亡小體（。7）Annexin V-FITC/PI雙染法檢測結(jié)果顯示，不同濃度W1-6（0、0.25、0.5、1.00 mg·L-1）作用24 h后， SW480細胞早期凋亡率分別為1.2%、6.9%、7.4%、9.3%，晚期凋亡率分別為8.5%、8.0%、10.1%、18.8%。與對照組比較，各給藥濃度組早期凋亡率差異具有顯著性（P<0.01），1.00 mg·L-1濃度組的晚期凋亡率也有差異

6、性（P<0.05）。（8）Western-blot檢測結(jié)果顯示，在W1-6作用24h后，隨著藥物濃度的增加，SW480細胞內(nèi)Bcl-2的表達量逐漸減少，而Cleaved Caspase-3的表達量逐漸增加。
　　結(jié)論：實驗通過對對映貝殼杉二萜化合物W1的結(jié)構(gòu)修飾，得到具有α-亞甲基環(huán)戊酮的新型對映貝殼杉二萜衍生物W1-6；試驗結(jié)果顯示，W1-6具有顯著的體外抗腫瘤作用，且具有一定的體內(nèi)抗腫瘤活性；抗腫瘤機制的初步探討顯示，其作用機