藤梨根干預(yù)食管癌細(xì)胞Ec9706-cDDP GST-π的研究.pdf

1、目的:食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一,目前在其綜合治療中,外科手術(shù)及放療仍然是首選的治療方式,但是許多患者在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)是中晚期,失去了手術(shù)和放療的最佳時機,因此化療亦占有非常重要的地位。然而食管癌在臨床上多存在腫瘤的耐藥,因而嚴(yán)重影響了物食管癌患者化療的療效及其預(yù)后。
　　谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是人體內(nèi)較為重要的代謝解毒酶系統(tǒng),廣泛存在于生物體內(nèi)。它能催化谷胱甘肽的巰基結(jié)合到內(nèi)源性或外源性親電子化合物上,使其極性提高,形成易溶

2、于水的化合物排出體外,是與毒物或致癌物質(zhì)解毒代謝有關(guān)的重要酶類。目前更多的研究發(fā)現(xiàn)GST-兀與腫瘤的發(fā)生及原發(fā)或繼發(fā)性耐藥相關(guān)。
　　藤梨根為獼猴桃科獼猴桃屬軟棗獼猴桃的根,具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、利尿止血的功效。臨床上常用于惡性腫瘤的治療,尤其對消化道腫瘤療效頗佳。近年發(fā)現(xiàn),藤梨根復(fù)方制劑體外對多種腫瘤有抑制作用,可通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用,其藥理研究和臨床驗證受到廣泛關(guān)注。本項目以Ec9706/cDDP細(xì)胞系為研究對象,運用

3、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的技術(shù)手段以及量化指標(biāo),觀察藤梨根提取物(RAE)是否通過降低耐順鉑食管癌細(xì)胞GST-π的表達(dá),從而起到逆轉(zhuǎn)食管癌化療耐藥的作用,具有較高的研究起點,也為中醫(yī)藥治療食管癌的機制研究提供了一條可供參考的思路和方法。
　　方法:1、在含DDP(0.5ug/ml)的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)Ec9706/cDDP;用MTT法檢測藤梨根提取物細(xì)胞毒性作用,找到無毒濃度進(jìn)行逆轉(zhuǎn)耐藥試驗;用MTT法檢測Ec9706/cDDP加與不

4、加藤梨根提取物培養(yǎng)48h后細(xì)胞存活率,根據(jù)加與不加兩組數(shù)據(jù)行直線回歸統(tǒng)計計算出各組半數(shù)抑制濃度(IC50),計算逆轉(zhuǎn)倍數(shù)=對照組IC50/試驗組IC50。2、將細(xì)胞系分為實驗組和對照組,實驗組細(xì)胞系用藤梨根提取物干預(yù),RT-PCR法分別檢測以上兩組細(xì)胞GST-π的表達(dá)。3、全部數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包處理,數(shù)據(jù)以x±S表示,IC50計算采用直線回歸,兩組數(shù)據(jù)比較,采用t檢驗。
　　結(jié)果:1、藤梨根提取物對Ec9706/c

5、DDP細(xì)胞存在細(xì)胞毒性作用,與藤梨根提取物濃度有關(guān)。1、5、10ug/ml組與對照組抑制率無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),藤梨根提取物100ug/ml,1mg/ml兩組抑制率分別為18.3％,29.9%與對照組比較有顯著意義(P<0.05)。故選用無毒藤梨根提取物濃度10ug/ml作為最佳逆轉(zhuǎn)實驗濃度。2、DDP單獨作用,DDP對Ec9706/cDDP的IC50為43.59ug/ml,DDP與非細(xì)胞毒性劑量10ug/ml的藤梨根提取物共同

6、作用,DDP對Ec9706/cDDP的IC50降低為26.27ug/ml,其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.66。3、A組的10個樣本中有8個GST-π基因呈高水平表達(dá),其余2個呈低水平表達(dá);B組的10個樣本中有1個GST-π基因呈高水平表達(dá),其余9個呈低水平表達(dá)。統(tǒng)計學(xué)分析表明GST-π基因在A、B兩組的表達(dá)程度上有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:藤梨根提取物可以逆轉(zhuǎn)Ec9706/cDDP細(xì)胞株對順鉑的耐藥,逆轉(zhuǎn)效果與劑量相關(guān),逆轉(zhuǎn)機制可