銀杏葉提取物EGb761拮抗谷氨酸興奮毒機制研究.pdf

1、目的：觀察銀杏葉提取物EGb761對KA誘導的海馬神經元興奮毒損傷的保護作用，研究EGb761對KA、NMDA誘導的培養(yǎng)海馬神經元全細胞電流的抑制作用，比較不同濃度EGb761對KA誘導全細胞電流的抑制差別，進一步觀察EGb761對KAR亞基GluK2的作用，揭示EGb761拮抗谷氨酸興奮毒的作用位點和內在機制，為臨床用藥提供依據(jù)。
　　方法：采用DAPI染色和TUNEL染色法檢測KA誘導的培養(yǎng)海馬神經元細胞的凋亡，檢測EGb76

2、1對海馬神經元的保護作用；采用細胞膜片鉗電生理技術，以KA、NMDA刺激海馬神經元細胞，記錄EGb761對KA、NMDA誘導的全細胞電流的抑制作用；觀察不同濃度EGb761對KA誘導電流的抑制作用以及電流方向的改變會否影響EGb761的抑制效果；通過向HEK293T細胞內轉染KAR亞基GluK2；給予PKC抑制劑，研究EGb761拮抗谷氨酸興奮毒作用的分子機制。
　　結果：DAPI染色和TUNEL染色的結果表明，銀杏葉提取物EGb

3、761對谷氨酸興奮毒的拮抗作用，EGb761可以保護神經元免受KA誘導的興奮毒性損傷。膜片鉗電生理實驗結果顯示，EGb761對KA誘導的全細胞電流具有抑制作用，而電流方向的改變不會影響EGb761的抑制作用，并且這種抑制作用呈現(xiàn)濃度依賴性；EGb761單體成份槲皮素對KAR也具有抑制作用。EGb761對NMDA誘導的全細胞電流也有抑制作用，EGb761濃度為50μg/ml時抑制效果即達到最強。不同時間給藥抑制效果不同，提前20s組抑制效

4、果最為明顯。在轉染了GluK2的HEK293T細胞上，EGb761在濃度為50μg/ml時，抑制效果最強，提前給藥組較未提前給藥組，抑制效果更強。EGb761同時可以抑制突觸前興奮性電流(mEPSC)頻率和幅度：在給予PKC抑制劑之后，EGb761對KA電流的抑制作用減弱。
　　結論：EGb761能抑制NMDA、KA誘導的全細胞電流，其對KA受體的抑制作用機制可能是直接作用于KA受體亞基，或通過胞內分子機制間接調控KA受體離子通道