用核酸探針和分子斑點雜交技術檢測家禽病毒的核酸.pdf

1、在雞群中同一個體同時存在不同的病毒感染是普遍現(xiàn)象，因此如何能同時檢測同一份病料中不同的病毒，對于疫病的鑒別診斷和流行病學研究甚為重要。本研究試圖運用分子斑點雜交技術，同時用不同的病毒核酸探針檢測同一批病料中的不同病毒，它們分別是禽網(wǎng)狀內皮組織增生癥病毒(REV)、馬立克氏病病毒(MDV)、雞傳染性貧血病毒(CAV)、呼腸孤病毒(ARV)和傳染性支氣管炎病毒(IBV)。 本實驗從泰安某市場采集地方品種雞的脾臟200份、羽毛囊200

2、份；從萊陽某商品肉雞場采集脾臟200份、雞胚100枚，共計700份樣品。用REV LTR序列和pol基因標記的核酸探針、MDV PP38基因標記的核酸探針、CAV VP1基因標記的核酸探針、ARV 63基因標記的核酸探針、IBV N基因標記的核酸探針，分別檢測REV、MDV、CAV、ARV和IBV。檢測結果如下： 200份地方品種雞脾臟樣品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的檢測結果：MDV陽性123份， CAV陽性91份

3、，ARV陽性21份，IBV陽性23份，用REV LTR序列標記的核酸探針檢出REV陽性194份，用REVpol基因標記的核酸探針檢出REV陽性10份。 200份地方品種雞脾臟樣品中MDV、CAV、ARV、mV和REV的共感染情況：MDV和REV共感染為7份，MDV和CAV共感染為60份，MDV和ARV共感染為17份，MDV和IBV共感染為10份，CAV和REV共感染為9份，CAV和ARV共感染為14份，CAV和IBV共感染為13

4、份，MDV、CAV和REV的三重感染為6份，MDV、CAV和ARV的三重感染為13份，MDV、CAV和IBV的三重感染為7份(REV的感染數(shù)據(jù)來自pol基因標記的核酸探針檢測結果)。 200份地方品種雞羽毛囊樣品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的檢測結果：CAV、ARV和IBV全部陰性，MDV陽性121份，用REV LTR序列和pol基因標記的核酸探針檢測REV全部陰性。 200份商品肉雞脾臟樣品中MDV、CAV

5、、ARV、IBV和REV的檢測結果：MDV陽性177份， CAV陽性143份， ARV和IBV全部陰性，用REV LTR序列標記的核酸探針檢出REV陽性103份，用REV pol基因標記的核酸探針檢測REV全部陰性。 200份商品肉雞脾臟樣品中MDV、CAV、ARV、IBV和REV的共感染情況：MDV和CAV的共感染為137份(REV的感染數(shù)據(jù)來自pol基因標記的核酸探針檢測結果)。 100份萊陽雞胚樣品中MDV、CAV、ARV

6、、IBV和REV的檢測結果：MDV、ARV和IBV全部陰性，CAV陽性100份，用REV LTR序列和00l基因標記的核酸探針檢測REV全部陰性。 在對200份地方品種雞和200份商品肉雞的脾臟樣品用REV LTR序列和pol基因標記的核酸探針同時檢測REV時，兩種核酸探針對REV的檢出率差異極大：在200份地方品種雞脾臟樣品中，用REV LTR序列標記的核酸探針檢出REV陽性194份，而用REV pol基因標記的核酸探針檢出R

7、EV陽性僅為10份，并且這10份陽性樣品包含在上面的194份陽性樣品中；在200份商品肉雞脾臟樣品中，用REV LTR序列標記的核酸探針檢出REV陽性103份，而用REV pol基因標記的核酸探針檢測REV全部陰性。對比結果表明，用REV LTR序列標記的核酸探針，對REV的檢測結果大部分是非特異性的，可能是由LTR序列整合到其它病毒或宿主基因組造成的REV假陽性，因此在應用分子斑點雜交技術檢測REV時，不能選用REV LTR序列標記探

8、針，而應選擇REV的其它基因標記探針，如pol基因，這樣很大程度上可以提高REV檢測的特異性。 從萊陽某種雞場送檢的疑似雞傳染性貧血的病雞骨髓、胸腺和法氏囊中提取組織DNA和RNA，斑點雜交檢測REV、MDV、CAV、ARV和IBv。檢測結果顯示：CAV全部陽性，REV、MDV、ARV和IBV全部陰性。以CAV陽性組織DNA為模板，設計一對特異性引物，對病料中的CAV的VPl基因進行了克隆和序列測定。序列測定結果顯示其VPl基因