奶山羊乳腺上皮細(xì)胞系的建立.pdf

1、應(yīng)用動物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥用蛋白是生物高新技術(shù)研究領(lǐng)域的熱點。乳腺生物反應(yīng)器研究從模式動物——小鼠的轉(zhuǎn)基因開始，逐步建立起了大動物乳腺生物反應(yīng)器制備的技術(shù)平臺。以牛羊等反芻動物制備乳腺生物反應(yīng)器的前景十分誘人。奶牛產(chǎn)奶量高，一旦得到高表達(dá)的個體，其產(chǎn)量和效益十分可觀。但奶牛作為單胎動物，生產(chǎn)周期長、成本高。目前利用轉(zhuǎn)基因羊制備乳腺生物反應(yīng)器有一些成功的例子。奶山羊泌乳期長，單位產(chǎn)奶量高，相對成本低，在乳腺生物反應(yīng)器的制備方面極具應(yīng)用價

2、值，以此為基礎(chǔ)將推動奶牛泌乳與乳腺生物反應(yīng)器研究的不斷深入。 體外培養(yǎng)的奶山羊乳腺上皮細(xì)胞在乳腺生長發(fā)育和泌乳機(jī)制的研究及乳腺生物反應(yīng)器的應(yīng)用等方面具有重要作用。目前建立的一些奶山羊乳腺上皮細(xì)胞系往往喪失了泌乳功能，不適合作為研究泌乳機(jī)制及檢測乳腺表達(dá)載體的細(xì)胞模型。因此有必要對奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)、激素與乳腺上皮細(xì)胞分泌功能的關(guān)系等方面進(jìn)行深入研究，以探索建立奶山羊乳腺生物反應(yīng)器細(xì)胞模型的有效方法。 本研究選用

3、泌乳性能好的關(guān)中奶山羊作為實驗材料。利用酶消化法獲得了奶山羊乳腺上皮細(xì)胞，對純化的乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行了鑒定。通過細(xì)胞培養(yǎng)體系的確立及生物學(xué)形狀的檢測建立并鑒定了奶山羊乳腺上皮細(xì)胞系。此外，SDS-PAGE、甘油三酯生化測定及HPLC法對乳蛋白、乳脂和乳糖的測定反映了激素對乳腺上皮細(xì)胞泌乳功能的影響。從而為奶山羊乳腺生物反應(yīng)器細(xì)胞模型的建立及奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳機(jī)制的研究提供實驗依據(jù)。 實驗結(jié)果表明，本研究獲得了純化的奶山羊乳腺上皮