黃芪提取物干預食管癌細胞Ec9706-cDDPpolβ的研究.pdf

1、食管癌是一種起源于食管上皮的惡性腫瘤，臨床上鱗癌多見，近年來腺癌、未分化癌及其他類型癌亦有增多趨勢，本病在全世界惡性腫瘤病種中都屬常見，在我們中國以河南、河北為首的某些省份以及江蘇、山西、陜西等省份的局部地區(qū)，食管癌的年新發(fā)病人數(shù)以及死亡人數(shù)在各類惡性腫瘤中也一直居高。對人們的健康生存構(gòu)成極大威脅，并成為了患者及其家庭成員重大的心理和經(jīng)濟負擔。但基于食管癌早期癥狀的不典型性，往往疾病進展期才獲得臨床干預，治療手段變得單一，這使得化療在本

2、病治療中的地位日益凸顯。然而隨著化學治療藥物應(yīng)用的普及，近年來腫瘤耐藥性也逐漸為人們所重視。這也成了臨床治療能否持續(xù)有效的主要影響因素。造成腫瘤細胞對藥物低反應(yīng)性的原因多樣且復雜，近年來國內(nèi)外學者對腫瘤耐藥機制及其逆轉(zhuǎn)方法進行了大量研究，這也為克服腫瘤細胞耐藥提供了除開發(fā)新型抗癌藥物外的新方向，即尋找能夠逆轉(zhuǎn)化療耐藥的逆轉(zhuǎn)劑。近年來研究者漸漸發(fā)現(xiàn)并關(guān)注到DNA聚合酶β在化療低敏腫瘤細胞中的異常表達。國內(nèi)外研究人員對西藥逆轉(zhuǎn)劑進行了廣泛探

3、索，但難于克服的正常組織毒性、新藥開發(fā)技術(shù)難度及不菲成本等，嚴重限制了其開發(fā)進程。基于廣泛抗腫瘤應(yīng)用，以及低毒性、多靶點作用等特點，人們逐漸將研究方向定位于天然中草藥，黃芪即是其中之一。
　　目的：黃芪是臨床常用抗腫瘤中藥之一，具有多種途徑的抗腫瘤機制，其抗腫瘤藥理研究及逆轉(zhuǎn)實驗備受關(guān)注。本項目采用現(xiàn)代實驗醫(yī)學的技術(shù)手段對Ec9706/cDDP細胞系進行研究并將其具體實驗指標進行量化，觀察實驗組中polβ基因表達水平的變化，探討黃

4、芪提取物(AE)干預后，食管癌耐藥細胞化療敏感性有效提升與polβ表達變化的相關(guān)聯(lián)系，以期拓展中藥逆轉(zhuǎn)耐藥的研究方法，并為中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥提供一定的實驗藥理學依據(jù)。
　　方法：①以加入順鉑的RPMI-1640作為 Ec9706/cDDP的培養(yǎng)基；用 MTT法檢測 AE對參與實驗細胞的毒性強度，確定無細胞毒性的逆轉(zhuǎn)耐藥實驗所需濃度；用 MTT法分別檢測加與不加 AE兩組Ec9706/cDDP細胞培養(yǎng)48h后的細胞存活率，對兩組實驗數(shù)

5、據(jù)行直線回歸統(tǒng)計，確定每一組別的半數(shù)抑制濃度(IC50)，再進一步計算出對照組實驗數(shù)據(jù)與實驗組的倍數(shù)關(guān)系即逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。②將細胞系分為對照組和實驗組，實驗組細胞系給予AE干預，用RT-PCR法檢測各組polβ的表達水平。③所有實驗數(shù)據(jù)一律選擇 SPSS17.0進行規(guī)范化處理，數(shù)據(jù)用x±S進行標注，IC50采用直線回歸法進行計算，采用 t檢驗法對比兩組數(shù)據(jù)統(tǒng)計差異。
　　結(jié)果：①黃芪提取物達一定濃度后對Ec9706/cDDP表現(xiàn)出一定的

6、細胞毒性作用，而這種作用的強度與 AE濃度呈現(xiàn)正相關(guān)。10μg/mL及此濃度以下的低劑量組抑制率與對照組相比顯示差異不顯著，100μg/mL組及更高濃度組抑制率達到18.8％和30.9%，與對照組進行 t檢驗進行比較,統(tǒng)計學差異顯著。是以選擇10μg/mL濃度的無細胞毒性AE進行實驗干預。②DDP單獨應(yīng)用對實驗細胞的半數(shù)抑制濃度為42.49μg/mL，AE非細胞毒性劑量10μg/ml與 DDP共同應(yīng)用，半數(shù)抑制濃度降低為25.17μg/

7、mL，二者差異達1.69倍。③以RT-PCR法檢測兩組細胞polβ的表達水平,對照組10個樣本中9個為高水平表達，1個低水平表達；實驗組10個樣本中2個為高水平表達，余下8個為低水平表達。統(tǒng)計比對分析兩組實驗數(shù)據(jù)，polβ表達水平差異顯著，具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：①AE對 Ec9706/cDDP細胞具有細胞毒作用，而其毒性與 AE濃度相關(guān)。②單獨應(yīng)用 DDP，對耐藥細胞系的IC50為42.49μg/mL，10μg/mL非細胞毒