藤梨根干預(yù)食管癌細(xì)胞Ec9706-cDDP GST-π的研究.pdf

1、目的:食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,目前在其綜合治療中,外科手術(shù)及放療仍然是首選的治療方式,但是許多患者在發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)是中晚期,失去了手術(shù)和放療的最佳時(shí)機(jī),因此化療亦占有非常重要的地位。然而食管癌在臨床上多存在腫瘤的耐藥,因而嚴(yán)重影響了物食管癌患者化療的療效及其預(yù)后。
　　谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSTs)是人體內(nèi)較為重要的代謝解毒酶系統(tǒng),廣泛存在于生物體內(nèi)。它能催化谷胱甘肽的巰基結(jié)合到內(nèi)源性或外源性親電子化合物上,使其極性提高,形成易溶

2、于水的化合物排出體外,是與毒物或致癌物質(zhì)解毒代謝有關(guān)的重要酶類。目前更多的研究發(fā)現(xiàn)GST-兀與腫瘤的發(fā)生及原發(fā)或繼發(fā)性耐藥相關(guān)。
　　藤梨根為獼猴桃科獼猴桃屬軟棗獼猴桃的根,具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、利尿止血的功效。臨床上常用于惡性腫瘤的治療,尤其對(duì)消化道腫瘤療效頗佳。近年發(fā)現(xiàn),藤梨根復(fù)方制劑體外對(duì)多種腫瘤有抑制作用,可通過(guò)多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用,其藥理研究和臨床驗(yàn)證受到廣泛關(guān)注。本項(xiàng)目以Ec9706/cDDP細(xì)胞系為研究對(duì)象,運(yùn)用

3、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的技術(shù)手段以及量化指標(biāo),觀察藤梨根提取物(RAE)是否通過(guò)降低耐順鉑食管癌細(xì)胞GST-π的表達(dá),從而起到逆轉(zhuǎn)食管癌化療耐藥的作用,具有較高的研究起點(diǎn),也為中醫(yī)藥治療食管癌的機(jī)制研究提供了一條可供參考的思路和方法。
　　方法:1、在含DDP(0.5ug/ml)的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)Ec9706/cDDP;用MTT法檢測(cè)藤梨根提取物細(xì)胞毒性作用,找到無(wú)毒濃度進(jìn)行逆轉(zhuǎn)耐藥試驗(yàn);用MTT法檢測(cè)Ec9706/cDDP加與不

4、加藤梨根提取物培養(yǎng)48h后細(xì)胞存活率,根據(jù)加與不加兩組數(shù)據(jù)行直線回歸統(tǒng)計(jì)計(jì)算出各組半數(shù)抑制濃度(IC50),計(jì)算逆轉(zhuǎn)倍數(shù)=對(duì)照組IC50/試驗(yàn)組IC50。2、將細(xì)胞系分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞系用藤梨根提取物干預(yù),RT-PCR法分別檢測(cè)以上兩組細(xì)胞GST-π的表達(dá)。3、全部數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,數(shù)據(jù)以x±S表示,IC50計(jì)算采用直線回歸,兩組數(shù)據(jù)比較,采用t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:1、藤梨根提取物對(duì)Ec9706/c

5、DDP細(xì)胞存在細(xì)胞毒性作用,與藤梨根提取物濃度有關(guān)。1、5、10ug/ml組與對(duì)照組抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),藤梨根提取物100ug/ml,1mg/ml兩組抑制率分別為18.3％,29.9%與對(duì)照組比較有顯著意義(P<0.05)。故選用無(wú)毒藤梨根提取物濃度10ug/ml作為最佳逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)濃度。2、DDP單獨(dú)作用,DDP對(duì)Ec9706/cDDP的IC50為43.59ug/ml,DDP與非細(xì)胞毒性劑量10ug/ml的藤梨根提取物共同

6、作用,DDP對(duì)Ec9706/cDDP的IC50降低為26.27ug/ml,其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.66。3、A組的10個(gè)樣本中有8個(gè)GST-π基因呈高水平表達(dá),其余2個(gè)呈低水平表達(dá);B組的10個(gè)樣本中有1個(gè)GST-π基因呈高水平表達(dá),其余9個(gè)呈低水平表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明GST-π基因在A、B兩組的表達(dá)程度上有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:藤梨根提取物可以逆轉(zhuǎn)Ec9706/cDDP細(xì)胞株對(duì)順鉑的耐藥,逆轉(zhuǎn)效果與劑量相關(guān),逆轉(zhuǎn)機(jī)制可