阿爾茨海默病中microRNA-34a作用機(jī)制的研究.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文阿爾茨海默病中micrNA34a作用機(jī)制的研究姓名：王曉映申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：秦川20090504中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文達(dá)可以明顯降低bel2蛋白水平，但是其mRNA水平無(wú)明顯變化，這提示我們bel2很有可能是mir34a的一個(gè)作用靶點(diǎn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證我們的想法，我們利用針對(duì)mir34a的反義寡核苷酸序列來(lái)抑制mir34a的表達(dá)，并分析其對(duì)bcl2蛋白表達(dá)的影響

2、，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與我們預(yù)想的一致，當(dāng)mir34表達(dá)降低以后，bcl2蛋白水平明顯升高，其mRNA水平無(wú)明顯改變，這一結(jié)果進(jìn)一步提示我們mir34a可能作用于bcl2為了證明bcl2mRNA的3UTR序列包含mir34a作用的位點(diǎn)，我們將bcl2mRNA的3UTR序列克隆至螢光報(bào)告載體中，并與mir34a表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染至SHSY5Y細(xì)胞中，然后檢測(cè)螢光素酶的活性，結(jié)果表明mir34a的過(guò)表達(dá)可以明顯抑制抑制螢光素酶的活性；與之相反，當(dāng)我們將bc

3、l23UTR螢光素酶報(bào)告載體中mir34a可能的結(jié)合位點(diǎn)采用定點(diǎn)突變的方法突變以后，再和mir34a表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染至SHSY5Y細(xì)胞中，螢光素酶的活性僅發(fā)生微弱的變化，這說(shuō)明mir34a可以直接作用于bcl2。除了證明mir34a和bcl2的關(guān)系以外，我們還檢測(cè)了活化的caspase9和caspase3的表達(dá)情況。我們發(fā)現(xiàn)無(wú)論是在APPswe／PSAE9小鼠中，還是在mir34a的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中，活化的caspase3和c唧ause9

4、的表達(dá)水平都明顯升高。當(dāng)我們抑制mir34a表達(dá)以后，bcl2表達(dá)水平升高，與此同時(shí)，活化的caspase3和caspase9的蛋白水平明顯降低，上述結(jié)果提示我們mir34a可以通過(guò)調(diào)節(jié)bcl2的表達(dá)水平來(lái)影響caspase3和caspase9的激活。無(wú)論是bcl2還是caspase一3和caspase9，它們都參與了AD的發(fā)生，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示我們bcl2可能是mir34a重要的功能靶點(diǎn)，mir34a的過(guò)表達(dá)可能通過(guò)下調(diào)bcl2的蛋