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文檔簡介
1、本文研究了生物制劑1α,25-二羥基維生素D3(calcitriol)對JAR細(xì)胞的增殖和分化的影響,探討其作用機(jī)制,為絨毛膜癌誘導(dǎo)分化治療提供一條新思路。 [方法]用不同濃度(10-8、107、10-6mol/L)calcitriol處理體外培養(yǎng)的絨毛膜癌細(xì)胞株JAR,分別在處理后不同的時(shí)間點(diǎn)(1d、3d、6d),以MTT比色法檢測calcitriol對JAR細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞儀檢測calcitriol對JAR細(xì)胞周期的
2、影響;光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)上觀察;RT-PCR檢測維生素D受體(VDR)mRNA水平的表達(dá);WesternBlot檢測VDR蛋白表達(dá)。 [結(jié)果] 1.1α,25-二羥基維生素D3抑制JAR細(xì)胞增殖MTT比色法檢測calcitriol對JAR細(xì)胞增殖的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著calcitriol濃度的增加,相對于對照組而言,A值減少;隨著時(shí)間的增加,同一濃度與對照組比較,A值減少,呈明顯的時(shí)間—?jiǎng)┝啃?yīng)關(guān)系。JAR細(xì)胞1
3、0-6mol/Lcalcitriol作用3d與對照組之間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),JAR細(xì)胞10-7、10-6mol/Lcalcitriol作用6d分別與對照組之間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。計(jì)算出抑制率(IR)及半數(shù)抑制濃度(IC50)。 2.1α,25-二羥基維生素D3誘導(dǎo)JAR細(xì)胞分化流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,JAR細(xì)胞應(yīng)用10-6mol/Lcalcitriol作用6天后(IC50組),G1期細(xì)胞
4、數(shù)百分比從47.78%增加到59.81%(P<0.01),S期細(xì)胞數(shù)百分比從54.6%減少到33.08%(P<0.01),表明calcitriol是通過G()G()期捕獲抑制JAR細(xì)胞增殖。JAR細(xì)胞10-6mol/Lcalcitriol作用6天后,HE染色后光學(xué)顯微鏡下觀察,與對照組比較,JAR細(xì)胞體積縮小,核/漿比下降,核型有不規(guī)則凹陷、扭曲,核分裂像減少。以上結(jié)果表明,calcitriol可誘導(dǎo)JAR細(xì)胞分化。 3.1α,
5、25-二羥基維生素D3上調(diào)VDRmRNA表達(dá)應(yīng)用RT-PCR檢測VDRmRNA的表達(dá),結(jié)果顯示,IC50組與對照組VDRmRNA相對表達(dá)豐度分別為3.79±0.21、2.24±0.16,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),calcitriol上調(diào)VDRmRNA表達(dá)。 4.1α,25-二羥基維生素D3上調(diào)VDR蛋白表達(dá)應(yīng)用WesternBlot檢測VDR蛋白表達(dá),經(jīng)BandScan4.3圖像分析軟件分析VDR/β-actin灰度比值
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