2005-2006年雞傳染性支氣管炎病毒中國(guó)分離株分子流行病學(xué)研究.pdf

1、本研究從我國(guó)8個(gè)省市分離或收集到2005-2006年間的12株IBV病毒，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，以說(shuō)明我國(guó)IBV毒株之間以及與參考毒株之間基因的遺傳變異情況及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，同時(shí)闡明我國(guó)IBV的基因型，探討我國(guó)IB流行的背景和原因。 采取現(xiàn)地瀕死病雞病變組織處理后，經(jīng)雞胚尿囊腔接種9-11日齡SPY雞胚，收集72h尿囊液，同時(shí)觀察胚體病變，通過(guò)致SPF雞胚病變特征、病毒對(duì)雞外周血紅細(xì)胞凝集特性、病毒粒子形態(tài)學(xué)特征等方面的研究

2、，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雞胚傳毒傳2-8代后，死亡雞胚表現(xiàn)出生長(zhǎng)發(fā)育障礙，胚體彌漫性出血，未死亡雞胚呈現(xiàn)典型的卷曲胚；病毒尿囊液不凝集雞的外周血紅細(xì)胞；在電鏡下呈球形，病毒囊膜表面有疏松排列的棒狀纖突，具有冠狀病毒粒子的形態(tài)特征，未發(fā)現(xiàn)有其它病毒粒子的存在。所以可初步斷定本研究所分離的病毒為雞傳染性支氣管炎病毒。 本研究應(yīng)用RT-PCR方法擴(kuò)增到了我國(guó)2005-2006年8個(gè)省市的12株IBV現(xiàn)地分離株的S1和部分N蛋白基因，并將其進(jìn)行了克

3、隆、序列測(cè)定及分析，為了說(shuō)明我國(guó)IBV毒株之間以及與參考毒株之間基因的遺傳變異情況，同時(shí)構(gòu)建了系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，分析了我國(guó)IBV分離株與參考毒株之間的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系。 通過(guò)S1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)中所分離的8株IBV毒株與分布于同一群內(nèi)的我國(guó)分離毒株LX4具有較高的同源性(95.3-97.0﹪)，并且此群毒株間的S1基因推導(dǎo)氨基酸序列具有較高的同源性(>91﹪)，親緣關(guān)系較近，而與我國(guó)目前用于IB預(yù)防的主要活疫苗H120屬于不

4、同的基因型且氨基酸序列同源性較低(≤8O.1﹪)，這可能是導(dǎo)致IB疫苗免疫失敗或只能產(chǎn)生部分免疫保護(hù)作用，以致IB在雞群中不斷發(fā)生的主要原因之一；還發(fā)現(xiàn)，毒株CK/CH/LSD/05I可能為一變異毒株。結(jié)合S1及N基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析可知：在S1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析中，毒株CK/CH/LDL/05I、CK/CH/LNM/05I和CK/CH/LGX/06I與毒株tl/CH/LDT3/03屬于同一進(jìn)化群，并且此三個(gè)毒株具有較高的氨基酸同源性，同

5、時(shí)，此三個(gè)毒株具有相同的插入和缺失位點(diǎn)，具有相似的纖突蛋白裂解位點(diǎn)，然而經(jīng)過(guò)N基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析得知，毒株CK/CH/LNM/05I和CK/CH/LGX/06I與毒株CK/CH/LDL/05I和tl/CH/LDT3/03的N基因?qū)儆诓煌幕蜻M(jìn)化群；此外還發(fā)現(xiàn)，毒株CK/CH/LSD/05I與疫苗株H120的N基因同源性最高(93.4﹪)。以上分析表明毒株CK/CH/LSD/05I可能是在ID疫苗免疫選擇壓力下所產(chǎn)生的變異毒株；毒株CK

6、/CH/LNM/05I和毒株CK/CH/LGX/06I可能發(fā)生了基因重組；同時(shí)，以疫苗株H120作為參考毒株，分析發(fā)現(xiàn)，12株IBV分離株在S1蛋白基因的HVR1和HVR2高變區(qū)內(nèi)含有較多插入和缺失現(xiàn)象；N基因及其局部功能區(qū)序列存在廣泛的氨基酸替代現(xiàn)象。 以上分析結(jié)果表明，我國(guó)IBV分離株存在較為廣泛的基因突變、插入和缺失，同時(shí)，IBV毒株間的基因重組也可能是我國(guó)IBV變異株產(chǎn)生的另一主要原因。 經(jīng)S1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析