P388D1細(xì)胞中P2X-,7-受體與CD44分子表達(dá)及其作用.pdf

1、目的：檢測(cè)P388D1細(xì)胞表面是否表達(dá)有功能的P2X7受體，證明P2X7受體與P388D1細(xì)胞表面表達(dá)的CD44分子間的相關(guān)性，進(jìn)一步探討P2X7受體與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。 方法：為了研究P388D1細(xì)胞中P2X7受體表達(dá)情況及P2X7受體的活性，作者等采用RT-PCR、Westernblotting、免疫熒光從基因及蛋白水平檢測(cè)P2X7受體表達(dá)情況，采用顯微鏡觀察激動(dòng)劑刺激后細(xì)胞膜變化的方法對(duì)P2X7受體的活性進(jìn)行檢測(cè)；為了

2、研究P2X7受體被其激動(dòng)劑ATP活化后與P388D1細(xì)胞表面表達(dá)的CD44分子相關(guān)性，作者等應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ATP作用后P388D1細(xì)胞表面CD44分子平均熒光強(qiáng)度的改變；為了明確ATP刺激后P388D1細(xì)胞表面CD44分子熒光強(qiáng)度的改變是由P2X7受體介導(dǎo)，作者等應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)使用P2X7受體的特效拮抗劑KN-62預(yù)處理的P388D1細(xì)胞表面CD44分子平均熒光強(qiáng)度的變化；為了證明P2X7受體與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性作者等采用

3、Transwell體外遷移實(shí)驗(yàn)比較ATP作用前后P388D1細(xì)胞遷移率的變化。 結(jié)果：RT-PCR、Westernblotting、免疫熒光結(jié)果均證明P388D1細(xì)胞表面表達(dá)P2X7受體。顯微鏡觀察激動(dòng)劑刺激后，細(xì)胞膜膜泡形成證明P388D1細(xì)胞表達(dá)的P2X7受體有活性。ATP時(shí)間組和劑量組的流式細(xì)胞儀結(jié)果均證明P388D1細(xì)胞經(jīng)P2X7受體激動(dòng)劑ATP作用后細(xì)胞表面CD44分子的平均熒光強(qiáng)度顯著降低，即CD44分子表達(dá)量降低。

4、應(yīng)用P2X7受體的特效拮抗劑KN-62抑制P2X7受體的活性后，ATP未能導(dǎo)致P388D1細(xì)胞表面CD44分子平均熒光強(qiáng)度降低，此結(jié)果表明，ATP作用P388D1細(xì)胞后導(dǎo)致CD44分子表達(dá)量的降低是由P2X7受體介導(dǎo)的。Tanswell體外遷移實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明P2X7受體被ATP活化后能夠降低腫瘤細(xì)胞的遷移率。 結(jié)論：P2X7受體經(jīng)ATP作用后使P388D1細(xì)胞表面表達(dá)的CD44分子的量顯著降低，同時(shí)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力亦隨之減弱。