柄海鞘（Styela clava）活性物質(zhì)的提取分離、純化及活性研究.pdf

1、目前，國外對海洋被囊動物海鞘生理活性物質(zhì)的研究進展迅速，分離獲得了眾多的活性物質(zhì)，并且很多進入臨床研究。但是，國內(nèi)對海鞘的研究，尤其是海鞘中的天然產(chǎn)物的分離及其活性方面的研究尚處于起步階段，不論在深度和廣度上都有待提高。而我國海洋海鞘資源豐富，尤其是山東省沿海海域海鞘資源更是極其豐富，與國外相比，不僅沒有得到有效開發(fā)利用，反而困擾著漁業(yè)和航海的發(fā)展，因此，應(yīng)當引起人們極大的關(guān)注。本論文以生物堿為主要目標物，對柄海鞘(Styela cla

2、va)鞘體活性物質(zhì)進行了初步的研究。 首先，將采集到的新鮮柄海鞘冷凍保存，將柄海鞘的鞘體和鞘囊進行精細剝離，避免了物質(zhì)的相互干擾，更好的進行活性物質(zhì)的定位。對柄海鞘鞘體組織勻漿，冷凍干燥，用10％氨水充分濕潤鞘體粉末，氯仿浸提，濃縮氯仿浸提液，濃縮液鹽酸酸化，乙醚萃取去除脂溶性雜質(zhì)，氫氧化鈉堿化后分別用乙醚、氯仿重新萃取，濃縮蒸干得到堿化乙醚相(JY)和堿化氯仿相(JL)；殘渣繼續(xù)經(jīng)乙酸乙酯浸提，濃縮蒸干得到紅褐色膏狀物，經(jīng)高效

3、液相半制備得到樣品YSYZ-P；而殘渣經(jīng)甲醇再次浸提，濃縮得到紅棕色粘稠物，經(jīng)鹽酸酸化處理，結(jié)晶純化得到無色透明晶體JC-C。 其次，對樣品進行了結(jié)構(gòu)解析，樣品YSYZ-P常溫下為淺黃色液態(tài)，風干為凝固膏狀物，凍干為小滴狀。高效液相色譜分析表明樣品較純，根據(jù)其紫外光譜圖、一維、二維核磁共振波譜圖，并對照化合物數(shù)據(jù)庫進行比對分析，初步推斷其為胸苷。樣品JC-C為無色透明晶體，呈長方體狀，晶型較為規(guī)整，硬度較大，經(jīng)粉末X-射線衍射分

4、析，為未知物，無法斷定其準確結(jié)構(gòu)，初步推測為生物堿鹽類。 最后，利用細胞培養(yǎng)技術(shù)，采用MTT法初步檢驗柄海鞘鞘體提取物的抑瘤活性，實驗數(shù)據(jù)顯示，精制樣品YSYZ-P體外抑瘤活性不穩(wěn)定，沒有濃度和時間規(guī)律性，200μ/ml濃度下作用于肝癌HepG2細胞24h抑制率最大，為48.42％；樣品JC-C的抑瘤活性不呈現(xiàn)規(guī)律性的濃度和時間變化，200lμ/ml濃度下作用于肝癌HepG2細胞72h時的抑制率最高，為48.97％。 根