閩南陳年腌制蘿卜活性物質(zhì)的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及活性研究.pdf

1、閩南陳年腌制蘿卜又稱“老菜脯”，是閩南、潮汕地區(qū)的傳統(tǒng)特色食品，當(dāng)?shù)厝艘步欣咸}卜干。其選材為優(yōu)質(zhì)的白蘿卜，采用傳統(tǒng)方法，加粗海鹽腌制藏于老壇，經(jīng)過(guò)多年自然陳放促成其烏黑發(fā)亮的色澤和獨(dú)特的風(fēng)味。本研究對(duì)不同腌制年份的閩南陳年腌制蘿卜的化學(xué)成分進(jìn)行了初步分析，對(duì)其化合物進(jìn)行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)部分化合物的抑菌和體外細(xì)胞抑制活性進(jìn)行了測(cè)定，目的在于尋找活性物質(zhì)，為閩南陳年腌制蘿卜開(kāi)發(fā)和應(yīng)用供科學(xué)依據(jù)。并為后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。
　　首

2、先，通過(guò)高效液相色譜—二極管陣列檢測(cè)器(HPLC-DAD)分離技術(shù)和相似度分析軟件對(duì)鮮白蘿卜和腌制腌制年份為5、10、15和20的腌制蘿卜的化學(xué)成分進(jìn)行了初步分析和比較。建立了新鮮白蘿卜與不同腌制年份閩南陳年腌制蘿卜的液相指紋圖譜，通過(guò)相似度軟件計(jì)算相似度，得出新鮮白蘿卜與不同腌制年份閩南成年腌制蘿卜的化學(xué)成分存在較大差異，并以此作為依據(jù)選擇差異較大的5年腌制年份閩南陳年腌制蘿卜作為進(jìn)一步研究的實(shí)驗(yàn)材料。
　　其次，制備5年腌制年

3、份閩南陳年腌制蘿卜的甲醇和乙酸乙酯粗提物，采用凝膠(Sephadex LH-20)柱層析、反相及正相硅膠柱層析技術(shù)對(duì)其進(jìn)行分離、純化，并且通過(guò)薄層層析(TLC)進(jìn)行物質(zhì)追蹤。最終，從甲醇粗提物分離得到化合物MA、MD、MQ和MI，從乙酸乙酯粗提物分離得到化合物EU、EW、EX、EY、EZ、Ea和Eb。
　　利用紫外吸收(UV)、質(zhì)譜(MS)、核磁共振(NMR)、高效液相色譜(HPLC)等現(xiàn)代波譜分析方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)?；衔锝Y(jié)構(gòu)

4、分析結(jié)果為：亞油酸甲酯(MA)、2,6-二羥基苯乙酮(MD)、對(duì)羥基苯甲醛(MQ)、5-羥甲基糠醛(MI)、β-谷甾醇(EU)、谷甾醇-3-O-葡萄糖苷(EW)、鄰苯二甲酸雙(2-乙基己基)酯(EX)、α-亞麻酸(EY)、1-棕櫚酸單甘油酯(EZ)和chaenomic acid A(Ea)，其中除對(duì)羥基苯甲醛外均為首次從閩南腌制蘿卜中分離純化得到。通過(guò)HPLC色譜初步分析各化合物的來(lái)源，判斷2,6-二羥基苯乙酮、5-羥甲基糠醛、對(duì)羥基苯

5、甲醛、谷甾醇-3-O-葡萄糖苷，為白蘿卜經(jīng)過(guò)腌制過(guò)程后產(chǎn)生的新化合物。
　　最后，結(jié)合使用牛津杯法、微量比色法和MTT法對(duì)部分化合物的抑菌和體外細(xì)胞抑制活性進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：對(duì)羥基苯甲醛、2,6-二羥基苯乙酮和5-羥甲基糠醛對(duì)釀酒酵母均表現(xiàn)較強(qiáng)的抑制作用?？莶菅挎邨U菌和大腸桿菌對(duì)對(duì)羥基苯甲醛和2,6-二羥基苯乙酮敏感。對(duì)羥基苯甲醛、5-HMF和對(duì)羥基苯乙醇對(duì)人肝癌細(xì)胞對(duì)HepG2的IC50分別為44.72μg/mL、42.2