豬乳鐵蛋白的分離純化與生物學(xué)特性研究.pdf

1、乳鐵蛋白具有廣泛的生物學(xué)活性，包括抗菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生蟲、抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)活性、對腸道菌群的影響、調(diào)控基因表達(dá)、促進(jìn)鐵的吸收等等；另外，乳鐵蛋白還具有許多其它的生理作用，包括血小板結(jié)合作用、促進(jìn)創(chuàng)口愈合作用、毒素結(jié)合作用以及促進(jìn)某些動物細(xì)胞生長的作用。乳鐵素不僅具有廣泛的生物學(xué)活性，而且比乳鐵蛋白的功能更強(qiáng)大。乳鐵蛋白和乳鐵素能作為高效補(bǔ)鐵食品、飼料添加劑、免疫調(diào)節(jié)劑、助消化劑、抗氧化劑、防腐劑和用于疾病預(yù)防、治療等等。

2、乳鐵蛋白與乳鐵素的生物學(xué)活性及其應(yīng)用是目前的研究熱點(diǎn)之一。人乳鐵蛋白和牛乳鐵蛋白的分離純化、結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特性研究得比較深入，而豬乳鐵蛋白研究得較少。本文對豬乳鐵蛋白的分離純化及其生物學(xué)功能進(jìn)行了初步研究。 1采用色譜法提取豬乳鐵蛋白，柱材料為CM Sephadex C-25，在pH值為7.2時(shí)，采用二步洗脫法純化豬乳鐵蛋白，通過HPLC測定其純度為89.6％。 2采用最小抑菌濃度(MIC)法研究了豬乳鐵蛋白的抑菌作用。結(jié)

3、果表明，豬乳鐵蛋白對金黃色葡萄球菌的MIC值為1250μg/mL，對大腸桿菌、沙門氏菌和巴氏桿菌的MIC值為1500μg/mL，對枯草芽孢桿菌的MIC值為1750μg/mL；標(biāo)準(zhǔn)牛乳鐵蛋白對金黃色葡萄球菌的MIC值為1000μg/mL，對大腸桿菌、沙門氏菌和巴氏桿菌的MIC值為1250μg/mL，對枯草芽孢桿菌的MIC值為1500μg/mL。結(jié)果提示，豬乳鐵蛋白對G<'+>菌的抑制作用比G<'->菌強(qiáng)，牛乳鐵蛋白比豬乳鐵蛋白的抑菌活性略

4、強(qiáng)。 3采用MIC法比較研究了豬乳鐵蛋白、牛乳鐵蛋白和豬乳鐵素對不同血清型和相同血清型不同耐藥性大腸桿菌抑菌活性的差異。結(jié)果表明，豬乳鐵蛋白對不同血清型和同一血清型不同耐藥性大腸桿菌的MIC為1500值μg/mL；牛乳鐵蛋白對不同血清型和同一血清型不同耐藥性大腸桿菌的MIC值為1250μg/mL；豬乳鐵素對不同血清型和同一血清型不同耐藥性大腸桿菌的MIC值為100μg/mL。結(jié)果提示，豬乳鐵蛋白和豬乳鐵素對不同血清型和不同耐藥性

5、大腸桿菌的抑制作用沒有差異，該結(jié)果與牛乳鐵蛋白相同。 4初步研究了不同碳源、氮源和電解質(zhì)離子強(qiáng)度對pLf抑菌活性的影響。結(jié)果表明，碳源(葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖和可溶性淀粉)和氮源(BSA、尿素和硫酸銨)對Lf的抗菌活性沒有影響。電解質(zhì)離子強(qiáng)度(離子濃度為25-150mmol/L的NaCl或KCI和1.25-10mmol/L的CaCl<,2>或MgCl<,2>)對Lf的抑菌活性影響較大，而且二價(jià)陽離子比一價(jià)陽離子的影響更大。

6、5通過測定酶解過程中消耗的NaOH的量和酶解產(chǎn)物抑菌效果相結(jié)合的方法來確定制備乳鐵素的最佳酶解條件。結(jié)果表明，豬乳鐵蛋白經(jīng)胃蛋白酶酶解制備乳鐵素的最佳條件是：底物濃度5％(W/V)，酶與底物濃度比為1∶30(W/W)，水解時(shí)間為60min。 6采用MIC法測定制備的豬乳鐵素的抑菌活性。結(jié)果表明，葡萄球菌的MIC為50μg/mL，其活性提高了25倍；對大腸桿菌、巴氏桿菌和沙門氏菌的MIC為100μg/mL，活性提高了15倍；對枯草