轉(zhuǎn)錄因子FOXM1的核酸適配體篩選與應(yīng)用.pdf

1、人類FOXM1蛋白屬于Forkhead Box(Fox)轉(zhuǎn)錄因子家族，到目前為止這個(gè)家族在人類基因組中擁有至少50個(gè)成員，分別參與調(diào)節(jié)了細(xì)胞的分化、增殖、代謝與凋亡等生理過(guò)程，同時(shí)還對(duì)腫瘤發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。FOXM1是一個(gè)與細(xì)胞增殖相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，它被發(fā)現(xiàn)在人類的多種腫瘤細(xì)胞中都存在較高的表達(dá)水平，表明FOXM1與多種癌癥的發(fā)生密切相關(guān)，如肝癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌等。因此，對(duì)FOXM1的深入研究將有助于進(jìn)一步揭示腫瘤發(fā)生的發(fā)病

2、機(jī)理，并為抗腫瘤藥物的研發(fā)提供可能的新靶點(diǎn)。
　　 針對(duì)蛋白功能研究，目前傳統(tǒng)方法多采用抗體免疫手段。近年來(lái)核酸適配體在生物分析、疾病診斷、治療、藥物篩選等方面的應(yīng)用引起了人們極大的興趣，以核酸適配體取代抗體利用ELISA和流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)，可以比使用抗體獲得更高的靈敏度。同時(shí)核酸適配體可以通過(guò)核酸化學(xué)方法進(jìn)行制備，經(jīng)過(guò)相應(yīng)的修飾及生物功能化，能夠達(dá)到對(duì)生物大分子、細(xì)胞等生物靶標(biāo)的選擇性檢測(cè)、定位和其生物功能的調(diào)控。

3、由于具有以上特點(diǎn)，核酸適配體在生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床診斷與治療方面顯示出巨大的應(yīng)用前景。
　　 本文以重組的GST-FOXM1融合蛋白作為靶蛋白，GST蛋白作為反篩蛋白，以包含有77個(gè)堿基的隨機(jī)單鏈DNA寡核酸庫(kù)作為初始庫(kù)，經(jīng)過(guò)7輪篩選，獲得了1條與靶蛋白FOXM1高特異性與高親和力結(jié)合的單鏈DNA核酸適配體JX42，該適配體與FOXM1的解離常數(shù)Kd達(dá)到225 nM。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)核酸適配體JX42在復(fù)雜體系中也可以特異性地識(shí)