脂肪干細(xì)胞移植對(duì)大鼠腦出血模型細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、干細(xì)胞是體內(nèi)存在的一類(lèi)具有可以自我更新，同時(shí)具有多向分化潛能的特殊細(xì)胞。隨著近期組織工程和基因治療技術(shù)的研究進(jìn)展，尋找合適的種子細(xì)胞及細(xì)胞替代治療已成為當(dāng)前生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)，胚胎干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為神經(jīng)修復(fù)開(kāi)辟了一個(gè)有效途徑，并且對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病治療采取的細(xì)胞替代治療即細(xì)胞移植已取得療效肯定。但是無(wú)論是胚胎干細(xì)胞還是神經(jīng)干細(xì)胞都存在著取材來(lái)源少，耗材多，生長(zhǎng)繁殖慢等缺點(diǎn)以及受法律、道德、倫理的限制，制約它們的發(fā)展及應(yīng)用。

2、 骨髓基質(zhì)細(xì)胞來(lái)源于中胚層間充質(zhì)多能干細(xì)胞，具有自我復(fù)制及多向分化潛能。骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植研究日益深入，己應(yīng)用于臨床治療心肌梗塞，并且移植到腦內(nèi)可改善神經(jīng)退行性疾病的神經(jīng)功能。然而骨髓基質(zhì)細(xì)胞獲取時(shí)需通過(guò)麻醉后抽取骨髓或取肋骨，給病人帶來(lái)痛苦，獲取數(shù)量有限，培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題限制其發(fā)展。 脂肪組織與骨髓一樣來(lái)源于中胚層，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞量多且可以多向分化。脂肪組織可以自體抽取，來(lái)源豐富，可自體細(xì)胞移植，無(wú)免疫排斥反應(yīng)，避免疾

3、病傳播，是干細(xì)胞生物工程研究的理想來(lái)源。 目的： 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用酶消化法，對(duì)SD大鼠腹股溝脂肪組織間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)，ADSC大鼠腦內(nèi)出血模型移植后進(jìn)行神經(jīng)功能測(cè)評(píng)，觀察ADSC腦內(nèi)移植后腦內(nèi)血腫周?chē)窠?jīng)細(xì)胞凋亡的情況，探討ADSC腦內(nèi)移植對(duì)腦內(nèi)血腫周?chē)窠?jīng)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制。 方法： 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)、增殖、鑒別及誘導(dǎo)健康成年Sprague-Dawley(S-D)大鼠，過(guò)量麻醉處死，無(wú)菌條件下取腹股溝脂肪

4、，用PBS反復(fù)沖洗，膠原酶消化脂肪組織進(jìn)行ADSC分離培養(yǎng)。對(duì)ADSC在體外進(jìn)行傳代培養(yǎng)，觀察其增殖能力。對(duì)培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞進(jìn)行成脂誘導(dǎo)。 脂肪干細(xì)胞的腦內(nèi)移植： 在立體定向儀定位下行SD大鼠右側(cè)尾狀核腦內(nèi)血腫模型制作。Ⅱ-Ⅲ代ADSC在立體定向儀定位下行右側(cè)腦室內(nèi)移植。約106個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞懸液約10ul。緩慢注入右側(cè)腦室。 腦出血模型ADSC腦內(nèi)移植后神經(jīng)功能測(cè)評(píng)比較采用longa等的5分評(píng)分法觀察模型組、對(duì)照

5、組、移植組3天、1周、2周、3周、4周神經(jīng)功能測(cè)評(píng)。 ADSC腦內(nèi)移植后Tunel染色： 將ADSC腦內(nèi)移植3天、1周、2周、3周、4周后按時(shí)間點(diǎn)捕殺大鼠，灌注后取腦標(biāo)本，送病理科制切片，行Tunel染色，觀察腦出血灶周?chē)蛲黾?xì)胞。 結(jié)果： 脂肪組織經(jīng)膠原酶消化，接種細(xì)胞24小時(shí)后貼壁生長(zhǎng)，原代培養(yǎng)7-10天，即達(dá)70-80％融合。2-4天細(xì)胞可再次傳代。經(jīng)過(guò)頻繁換液、傳代，細(xì)胞得以純化。加入成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)

6、基誘導(dǎo)2-4天后培養(yǎng)液就出現(xiàn)含脂滴的細(xì)胞。對(duì)照組培養(yǎng)后未見(jiàn)脂肪細(xì)胞形成。 大鼠腦出血模型內(nèi)移植ADSC后神經(jīng)功能改善明顯，對(duì)照組模型組無(wú)差異，而移植組與模型組，移植組與PBS組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 大鼠腦出血模型腦內(nèi)移植ADSC組腦出血周?chē)蛲黾?xì)胞數(shù)小于模型組，從第3天開(kāi)始隨時(shí)間增加凋亡數(shù)越來(lái)越少。 結(jié)論： 1.從S-D大鼠腹股溝脂肪組織中可分離、培養(yǎng)出ADSCs。ADSCs在10％FBS的低糖DMEM培