甲基丙二酸血癥基因突變研究.pdf

1、甲基丙二酸血癥（methymalonic acidemia，MMA）是一種常染色體隱性遺傳病，主要是由于甲基丙二酰輔酶A變位酶(Methylmalonyl-CoA mutase，MCM)自身缺陷或其輔酶鈷胺素(Cobalamin，cbl，VitB12)代謝缺陷，導(dǎo)致甲基丙二酸、3-羥基丙酸及甲基枸櫞酸等代謝物異常蓄積[1]。MMA臨床表現(xiàn)多樣化，最常見的癥狀和體征是反復(fù)嘔吐、嗜睡、驚厥、肌張力低下及運(yùn)動(dòng)智力發(fā)育落后。根據(jù)酶缺陷類型分為M

2、CM缺陷（Mut型）及其輔酶鈷胺素代謝障礙兩大類。MCM完全無活性者為mut0型，有殘余活性者為mut-型，編碼基因?yàn)镸UT。輔酶鈷胺素代謝障礙包括cblA、cblB、cblC、cblD、cblF和cblH。其中cblA、cblB、cblC、cblD和cblF相應(yīng)編碼基因分別為MMAA、MMAB、MMACHC、MMADHC及LMBRD1。Mut0、mut-、cblA、cblB和cblH僅表現(xiàn)為MMA，故稱為單純MMA，而cblC、cbl

3、D和cblF則導(dǎo)致腺苷鈷胺素和甲基鈷胺素合成缺陷，血同型半胱氨酸增高，故稱為MMA合并同型半胱氨酸血癥。 目的： 本研究目的在于檢測(cè)中國(guó)MMA患兒的基因突變類型及突變頻率，分析患兒臨床資料，探討突變基因型與臨床表型之間的關(guān)系，為有需求的MMA患者家庭提供基因診斷、產(chǎn)前診斷及高危攜帶者診斷服務(wù)。 對(duì)象： 對(duì)2003年01月～2009年02月收集的71例MMA患兒進(jìn)行基因研究。其中34例經(jīng)本院小兒內(nèi)分泌、遺傳

4、代謝病研究室診斷，臨床資料相對(duì)齊全，故對(duì)其進(jìn)行臨床診治分析。34例患兒經(jīng)北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科確診，3例經(jīng)廣州兒童醫(yī)院確診。所有患兒父母系非近親婚配，所有檢查均獲得患兒家長(zhǎng)或監(jiān)護(hù)人的知情同意。 方法： 1. MMA診斷及分型：（1）根據(jù)串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)患兒血中丙酰肉堿(propionylcarnitine，C3)、C3與游離肉堿(free carnitine，C0)比值和C3與乙酰肉堿(acetylcarnitine,C2)

5、比值；氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)尿甲基丙二酸水平進(jìn)行診斷。（2）對(duì)確診患者依據(jù)血清同型半胱氨酸水平，分為單純MMA和MMA合并同型半胱氨酸血癥。（3）依據(jù)VitB12負(fù)荷試驗(yàn)結(jié)果分為VitB12有效型和無效型。 2.基因突變分析：通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及直接測(cè)序法，進(jìn)行基因突變檢測(cè)；利用PCR-直接測(cè)序法和限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性方法進(jìn)行未報(bào)道突變鑒定。 3.臨床資料分析：整理匯總MMA患兒臨床資料，利用SSPS 17.0

6、 統(tǒng)計(jì)軟件分析患兒基因突變類型與臨床表現(xiàn)型之間的關(guān)系。 結(jié)果： 1.在71例MMA患兒中，50例為MMA合并同型半胱氨酸血癥，21例為單純MMA；55例為VitB12有效型，16例為無效型。血中C3、C3/C0與C3/C2顯著升高，尿中甲基丙二酸顯著增高、3-羥基丙酸和甲基枸櫞酸輕度增高。 2.在MMA合并同型半胱氨酸血癥50例患兒中46例檢測(cè)到MMACHC基因突變，突變檢出率為90％。共檢測(cè)出17種突變，其

7、中9種尚未報(bào)道突變，突變集中在外顯子3和4上(93.3％)，突變類型以無義突變?yōu)橹?57％)。609G>A(W203X) 突變最常見，突變頻率為51％。 3.在單純MMA 21例患兒中16例檢測(cè)出MUT基因突變。共檢測(cè)到19種突變，其中9種為尚未報(bào)道突變，突變集中在外顯子2和3上(50％)，突變類型以錯(cuò)義突變?yōu)橹?63.2％)。 4.MMA合并同型半胱氨酸血癥患兒均為VitB12有效型。單純MMA患兒中，5例為Vit

8、B12有效型，其中4例為MUT；11例為無效型，其中10例為MUT型。 結(jié)論： 1.中國(guó)MMA患兒中以MMA合并同型半胱氨酸血癥最常見(50/71)，單純MMA較少見(21/71)。 2.MMA合并同型半胱氨酸血癥患者中cblC型多見(46/50)，且存在609G>A(W203X)熱點(diǎn)突變(51％)；單純MMA患者中Mut型多見。 3.cblC型患兒609G>A突變者發(fā)病較早，較遲發(fā)型患兒病情嚴(yán)重；