中國野生華東葡萄VpCN基因轉化歐洲葡萄無核白的研究.pdf

1、葡萄（Vitis spp.）是世界上重要的經濟水果，尤其是歐洲葡萄（Vitis vinifera L.）品質好、風味純正、產量高，在世界葡萄栽培中占據著重要位置。但是，由真菌病害引起的白粉病給歐洲葡萄的生產和銷售帶來了巨大的經濟損失，利用轉基因技術對歐洲葡萄進行定向遺傳改良是解決這一問題的有效途徑。中國野生華東葡萄白河-35-1對白粉病具有很強的抗性，挖掘中國野生葡萄種質資源相關抗病基因和研究其功能對葡萄抗病育種具有重要的意義。課題組前

2、期克隆到中國野生華東葡萄白河-35-1抗白粉病相關基因VpCN，轉化擬南芥表現出對白粉病抗性。本研究為進一步驗證該基因功能，建立5種葡萄體細胞胚胎再生途徑，并以葡萄原胚團為受體材料，與農桿菌共培養(yǎng)，將VpCN基因轉入感白粉病的歐洲葡萄品種無核白，為改良歐洲葡萄品種抗病性提供理論依據。具體內容及取得的成果如下:
　　1、誘導得到紅地球、無核白、赤霞珠、商-24、塘尾等5種葡萄的胚性愈傷組織以及體細胞胚。以紅地球、無核白、赤霞珠、商-

3、24、塘尾的花藥、子房以及小花蕾為外植體，在MC、MS1、DM培養(yǎng)基上誘導，得到胚性愈傷組織。無核白花藥在MC培養(yǎng)基（NN69+30g/L蔗糖+2.5uM2，4-D+2.5uM NOA+5.0uM4-CPPU+0.1g/L肌醇+7g/L TC瓊脂）上誘導效率最高，為24.00％。X6培養(yǎng)基（MS+60g/L蔗糖+7g/L TC瓊脂）比NB培養(yǎng)基更適合體胚的誘導。
　　2、通過體細胞胚途徑獲得了無核白葡萄的再生株系，DM培養(yǎng)基（DK

4、W+30g/L蔗糖+2.5uM2，4-D+5.0uM6-BA+2.5uM NOA+1.0g/L肌醇+7g/L TC瓊脂）更適合用于次生胚性愈傷的誘導。
　　3、采用農桿菌介導法，將攜帶VpCN基因的植物表達載體轉入歐洲葡萄無核白葡萄的原胚團中，得到無核白葡萄的抗性胚。而且，原胚團比體細胞胚更適用于無核白葡萄遺傳轉化的受體材料。
　　4、構建VpCN的亞細胞定位載體pBI221-VpCN-GFP，通過農桿菌侵染將融合載體導入洋