KLF-4促進(jìn)富集結(jié)腸癌干細(xì)胞的球細(xì)胞發(fā)生EMT的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究KLF-4對富集結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞的球細(xì)胞發(fā)生EMT的作用。
　　方法：采用結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT116、HT29，通過無血清干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行球培養(yǎng)。通過RT-PCR、Western-blot檢測HCT116、HT29及其相應(yīng)球細(xì)胞的KLF-4、干細(xì)胞基因、EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)；Transwell試驗(yàn)檢查細(xì)胞遷移和侵襲能力；CCK-8檢測細(xì)胞的耐藥性；平板克隆、有限稀釋法試驗(yàn)檢測細(xì)胞體外克隆能力。設(shè)計KLF-4siRNA慢病

2、毒，轉(zhuǎn)染球細(xì)胞后，檢測其KLF-4、干細(xì)胞指標(biāo)及EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況。同時再次檢測干細(xì)胞的比例；細(xì)胞的遷移及侵襲能力、耐藥性、細(xì)胞體外克隆能力；裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：與HCT116、HT29細(xì)胞相比，其相應(yīng)的球細(xì)胞KLF-4的表達(dá)明顯升高（P<0.05）;球細(xì)胞發(fā)生EMT，上皮表型表達(dá)下降（P<0.05），間質(zhì)表型表達(dá)升高（P<0.05），同時Jnk1表達(dá)升高（P<0.05）；同時球細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的轉(zhuǎn)