miR-143在甲狀腺相關(guān)性眼病中的作用機制及糖皮質(zhì)激素臨床沖擊治療研究.pdf

1、目的:通過研究miR-143對甲狀腺相關(guān)性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy，TAO)患者眶后成纖維細胞(OFs)促甲狀腺激素受體(TSHR)表達的調(diào)控及透明質(zhì)酸(HA)分泌的影響，探討miRNA-143在TAO發(fā)生與發(fā)展中的分子機制。且通過臨床研究評價大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊治療方法對TAO的療效及對腎上腺皮質(zhì)功能的影響。
　　 方法:取TAO患者及對照組成纖維細胞原代培養(yǎng)，運用免疫熒光技術(shù)進

2、行鑒定。通過Real-time PCR方法檢測兩組眶后成纖維細胞miRNA-143的表達量，驗證芯片結(jié)果準確性。人工合成反義寡核苷酸(anti-miR-143)和miR-143模擬體(miR-143mimics)，轉(zhuǎn)染至TAO患者成纖維細胞，應用Real-Time PCR和Western blotting方法檢測轉(zhuǎn)染細胞中TSHR mRNA及蛋白的表達變化，雙熒光素酶報告基因檢測miRNA-143的作用靶點。ELISA法測定眶后成纖維細

3、胞轉(zhuǎn)染前后HA分泌量的變化。臨床研究將48例活動性中、重度TAO患者采用分層隨機方法分為間歇治療組（24例）和維持治療組(24例)。兩組患者分別于沖擊治療前，沖擊治療結(jié)束后第4周及第24周進行療效與不良反應評定，并檢測血清皮質(zhì)醇(F)晝夜節(jié)律、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)及24小時尿皮質(zhì)醇水平，分析兩種治療方案療效及對腎上腺皮質(zhì)功能的影響。
　　 結(jié)果:1.與對照組眶后成纖維細胞相比，miR-143基因在TAO患者中呈低水平表達

4、，與基因芯片結(jié)果一致。2.miRNA-143過表達后成纖維細胞的TSHR mRNA的表達水平下降，對應的TSHR蛋白的表達水平下降;相反，miR-143抑制性表達后TSHR的mRNA及蛋白表達水平升高，P＜0.05。雙熒光素酶報告基因載體方法證實miR-143直接作用于TSHR mRNA的3'UTR區(qū)發(fā)揮作用。3.miR-143抑制性表達后對成纖維細胞HA的分泌起到促進作用。4.糖皮質(zhì)激素間歇治療組、維持治療組療效（有效率分別為83.3

5、％、87.5％，無效或惡化率分別為16.7％、12.5％，F(xiàn)=0.68;復發(fā)率分別為20％、19.0％，F(xiàn)=0.94)無顯著差異，維持治療組患者在沖擊治療結(jié)束后第4周腎上腺皮質(zhì)功能受到顯著抑制(P＜0.05)，在沖擊治療結(jié)束后第24周均恢復正常。
　　 結(jié)論:在TAO患者眶后成纖維細胞中miR-143基因呈顯著低表達，通過上調(diào)TSHR的表達水平，促進成纖維細胞的HA的分泌參與TAO的發(fā)生與發(fā)展。臨床大劑量甲基強的松龍間歇沖擊治療