保加利亞乳桿菌生物學(xué)特性及原生質(zhì)體制備的研究.pdf

1、本文主要對(duì)保加利亞乳桿菌菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行觀察，并對(duì)其原生質(zhì)體制備進(jìn)行了初步的探討。 系列Ⅰ保加利亞乳桿菌生物學(xué)特性的研究。 1.保加利亞乳桿菌生長情況的觀察。保加利亞乳桿菌為革蘭氏陽性菌，無芽孢，細(xì)長桿菌，有的呈長鏈排列。MRS肉湯呈均勻渾濁，有少許絮狀沉淀。菌落形態(tài)與其生長的氣體環(huán)境有關(guān)。 2.保加利亞乳桿菌碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)酸試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)保加利亞乳桿菌能利用葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖、蔗糖，不能夠利用纖維

2、二糖、甘露醇、阿拉伯糖、半乳糖、棉子糖、麥芽糖。 3.不同氣體環(huán)境對(duì)保加利亞乳桿菌生長的影響。在有氧環(huán)境、CO2、和無氧環(huán)境下對(duì)保加利亞乳桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)其菌落和細(xì)菌的形態(tài)進(jìn)行觀察。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：無氧環(huán)境下，菌落為蠟白色濕潤，較大，細(xì)菌形態(tài)為粗直短桿狀；CO2環(huán)境下，菌落為半透明，較小，細(xì)菌為細(xì)長彎曲長桿狀；有氧環(huán)境下，菌落為半透明，較小，細(xì)菌形態(tài)為細(xì)長彎曲長桿狀。結(jié)果表明保加利亞乳桿菌在無氧環(huán)境下生長較好。 4.不同初始p

3、H值對(duì)保加利亞乳桿菌生長的影響。用不同初始pH的MRS肉湯來培養(yǎng)保加利亞乳桿菌，觀察其生長情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，保加利亞乳桿菌在初始pH6時(shí)生長較好，pH5時(shí)生長一般，pH4時(shí)生長較差，pH值2和8時(shí)不生長。結(jié)果表明，保加利亞乳桿菌最適的初始pH值為6。 5.不同培養(yǎng)溫度對(duì)保加利亞乳桿菌生長的影響。將保加利亞乳桿菌置不同溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，觀察其生長情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，保加利亞乳桿菌在37℃和42℃時(shí)生長較好，55℃時(shí)生長較差，20℃和60℃

4、時(shí)不生長。結(jié)果表明，保加利亞乳桿菌的最適培養(yǎng)溫度是37℃～42℃。 6.保加利亞乳桿菌生長動(dòng)力學(xué)特性的觀察。通過測定不同培養(yǎng)時(shí)間的保加利亞乳桿菌培養(yǎng)液的OD600和pH，來描繪細(xì)菌的生長曲線和pH值變化曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，保加利亞乳桿菌生長延滯期為0～2h，生長對(duì)數(shù)期為2～16h，16h以后為生長穩(wěn)定期和衰亡期。pH值隨培養(yǎng)時(shí)間的延長而降低，當(dāng)降低到pH值為4.2時(shí)，曲線不再下降。 7.不同保存方法對(duì)保加利亞乳桿菌的存活力和

5、穩(wěn)定性的影響。用MRS肉湯、脫脂乳和甘油冷凍保存法對(duì)保加利亞乳桿菌進(jìn)行保存，每隔一定時(shí)間進(jìn)行存活力的檢測，并進(jìn)行碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)酸試驗(yàn)來觀察其穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用脫脂乳保存和甘油冷凍保存的細(xì)菌存活力達(dá)四個(gè)月，用MRS肉湯保存的細(xì)菌在一周內(nèi)存活力便大大降低。保存期間，脫脂乳保存和甘油冷凍保存的菌株發(fā)酵碳水化合物的特性沒有改變。結(jié)果表明，用脫脂乳保存和甘油保存的菌株存活期長，穩(wěn)定性高。 系列Ⅱ保加利亞乳桿菌原生質(zhì)體制備的初步研究。

6、 1.保加利亞乳桿菌制備效果檢驗(yàn)方法的比較。用稀釋裂解法和血球計(jì)數(shù)法計(jì)算相同時(shí)間里原生質(zhì)體形成率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)用稀釋裂解法計(jì)算得到的原生質(zhì)體形成率比血球計(jì)數(shù)法平均要高10％，由于稀釋裂解法實(shí)驗(yàn)過程麻煩，誤差較大，因此實(shí)驗(yàn)決定采用血球計(jì)數(shù)法。 2.最佳酶濃度的選擇。用不同濃度的Mutanolysin來制備原生質(zhì)體，在30min時(shí)計(jì)算原生質(zhì)體形成率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，濃度為2ug/ml，4ug/ml，6ug/ml時(shí)的原生質(zhì)體形成率分別為3

7、1.5％，56.1％，100％。由于原生質(zhì)體形成率與再生率成反比，所以本實(shí)驗(yàn)采用的酶濃度為4ug/ml。 3.最佳作用時(shí)間的選擇。在濃度為4ug/ml的Mutanolysin作用的不同時(shí)間，進(jìn)行原生質(zhì)體形成率的測定。發(fā)現(xiàn)在0～75min內(nèi)，原生質(zhì)體形成率隨著作用時(shí)間的延長而增加，75min以后原生質(zhì)體形成率增加緩慢。由于酶解時(shí)間越長，細(xì)胞脫壁越徹底，其原生質(zhì)體的再生率越低，因此選擇45～60min為最佳作用時(shí)間。 4.甘