NOGO-A與NG-R在神經(jīng)元腫瘤細胞中的表達及意義的實驗研究.pdf

1、第一部分
　　 Part I
　　 目的：通過檢測正常人腦組織和星形膠質(zhì)瘤組織中NOGO-A與NG-R(Nogo-A Receptor)的表達，探討NOGO-A、NG-R與星形膠質(zhì)瘤惡性程度的關(guān)系及其兩者之間的相關(guān)性。
　　 方法：取正常人腦組織8例和星形膠質(zhì)瘤組織37例，采用免疫組織化學染色法檢測各組織中NOGO-A與NG-R蛋白的表達，并用免疫印跡法(Western blot)對各組蛋白進行定量分析；采用逆轉(zhuǎn)

2、錄酶聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測各組織中NOGO-A與NG-R mRNA水平。
　　 結(jié)果：NOGO-A與NG-R在正常腦組織中僅有少量表達,在星形膠質(zhì)瘤細胞膜和細胞漿及血管內(nèi)皮細胞中有顯著表達。隨著腦膠質(zhì)瘤病理分級的增高，NOGO-A與NG-R表達明顯增強(P<0.05)，NOGO-A和NG-R mRNA及蛋白表達均存在正相關(guān)(r＝0.990，P<0.05；r＝0.943，P<0.05)。
　　 結(jié)論：NOGO-A

3、與NG-R在人星形膠質(zhì)瘤組織中表達強度與其惡性程度呈正相關(guān)，且NOGO-A與NG-R的表達之間有內(nèi)在聯(lián)系，推測NOGO-A與NG-R共同促進星形膠質(zhì)瘤的形成與發(fā)展。
　　 Part II
　　 目的：通過檢測正常人腦組織和少突膠質(zhì)細胞瘤組織中NOGO-A與NG-R的表達，探討NOGO-A、NG-R在少突膠質(zhì)瘤形成過程中的作用。
　　 方法：取正常人腦組織8例和少突膠質(zhì)細胞瘤組織12例，采用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(R

4、T-PCR)、免疫組織化學染色方法檢測各組織中NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白的表達。
　　 結(jié)果：NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白在正常腦組織中僅有少量表達,在少突膠質(zhì)細胞瘤中高表達。
　　 結(jié)論：NOGO-A與NG-R在人少突膠質(zhì)細胞瘤的表達明顯高于正常組織，推測NOGO-A與NG-R共同促進少突膠質(zhì)細胞瘤形成與發(fā)展。
　　 Part III
　　 目的：通過檢測正常人腦組織和神經(jīng)母細胞瘤

5、組織中NOGO-A與NG-R的表達，探討NOGO-A、NG-R與神經(jīng)母細胞瘤惡性程度的關(guān)系。
　　 方法：取正常人腦組織8例和神經(jīng)母細胞瘤組織35例，采用免疫組化染色方法檢測各組織中NOGO-A與NG-R的表達。
　　 結(jié)果：NOGO-A與NG-R在正常腦組織中有少量表達,在神經(jīng)母細胞瘤中高表達。隨著神經(jīng)母細胞瘤病理級別的升高，NOGO-A和NG-R的表達逐漸增強。
　　 結(jié)論：人神經(jīng)母細胞瘤惡性程度越高，NOG

6、O-A與NG-R表達越強，推測NOGO-A與NG-R共同促進神經(jīng)母細胞瘤形成與發(fā)展。
　　 Part IV
　　 目的：通過檢測正常人腦組織和原始神經(jīng)外胚葉腫瘤組織中NOGO-A與NG-R的表達，探討NOGO-A與NG-R在原始神經(jīng)外胚葉腫瘤形成過程中的作用。
　　 方法：取正常人腦組織8例和原始神經(jīng)外胚葉腫瘤組織15例，采用免疫組織化學染色方法檢測各組織中NOGO-A與NG-R蛋白的表達。
　　 結(jié)果：

7、NOGO-A與NG-R在正常腦組織中有少量表達,在原始神經(jīng)外胚葉腫瘤組織中有高表達。
　　 結(jié)論：NOGO-A與NG-R在人原始神經(jīng)外胚葉腫瘤中強表達，推測NOGO-A與NG-R在人原始神經(jīng)外胚葉腫瘤的形成與發(fā)展過程中有重要作用。
　　 第二部分
　　 Part I
　　 目的：通過檢測原始神經(jīng)元細胞生長分化過程中NOGO-A與NG-R的表達，探討NOGO-A與NG-R在原始神經(jīng)元細胞生長發(fā)育過程中的作用

8、。
　　 方法：培養(yǎng)大鼠嗜鉻細胞瘤細胞系PC12細胞，用神經(jīng)生長因子誘導其分化。采用免疫熒光染色、逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(RT-PCR)及免疫印跡法(Western blot)等方法檢測PC12細胞生長分化過程中NOGO-A與NG-RmRNA及蛋白的表達及變化，并于倒置顯微鏡下隨機取20視野計數(shù)觀察細胞增值和軸突生長情況。
　　 結(jié)果：未分化的PC12細胞中未檢測到NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白表達。經(jīng)神經(jīng)生長因子

9、誘導的PC12細胞，細胞軸突不斷生長，NOGO-A與NG-R mRNA及蛋白的表達逐漸增高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：PC12細胞向交感神經(jīng)元分化的過程中NOGO-A與NG-R的表達逐漸增強，推測NOGO-A與NG-R在神經(jīng)元發(fā)育早期可能促進軸突生長。
　　 Part II
　　 目的：通過檢測PC12細胞生長發(fā)育過程中多巴胺的分泌及NOGO-A與NG-R的表達，探討NOGO-A與NG-R對神經(jīng)元細胞的神經(jīng)內(nèi)

10、分泌的調(diào)節(jié)。
　　 方法：培養(yǎng)大鼠嗜鉻細胞瘤細胞系PC12細胞，用神經(jīng)生長因子誘導其分化。分別取未經(jīng)誘導、誘導后第一天、第三天、第五天、第七天的細胞培養(yǎng)液，采用ELISA方法檢測各組培養(yǎng)液中多巴胺(Dopamine，DA)濃度，同時采用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(RT-PCR)及免疫印跡法(Western blot)等方法檢測培養(yǎng)液中NOGO-A與NG-RmRNA及蛋白的表達及變化。
　　 結(jié)果：未經(jīng)誘導的PC12細胞培養(yǎng)液中