茶葉提取物對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞保護(hù)作用.pdf

1、帕金森病是一種影響患者活動能力的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，多發(fā)于中老年以上人群。至今關(guān)于帕金森病的病理研究較多、較透徹;但治療尚無根治性的方法。茶葉提取物和茶熱水浸出物無或低毒副作用，并且獲取方便，尤其后者通過日常飲茶就能攝入，非帕金森病患者也能通過日常飲茶起到預(yù)防作用。
　　本文以6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞為帕金森病(Parkinson Disease，PD)體外細(xì)胞模型，以6種主要茶葉提取物(EGCG、咖啡堿、L-茶氨

2、酸、茶多酚、茶黃素和茶色素)、EGCG納米粒子以及綠茶、紅茶、普洱茶茶湯為試驗(yàn)材料，在研究6種茶葉提取物對6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用的基礎(chǔ)上，制備了EGCG納米粒子并探討其與相同濃度EGCG相比對細(xì)胞的毒性和6-OHDA損傷時(shí)的保護(hù)作用。通過westem blot檢測6-OHDA對SH-SY5Y細(xì)胞毒性作用機(jī)制中的相關(guān)蛋白表達(dá)量的變化，探討PD的病因和發(fā)病機(jī)制，揭示茶葉提取物及EGCG納米粒子對6-OHDA損傷的SH

3、-SY5Y細(xì)胞保護(hù)作用機(jī)制。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了茶湯對6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用。取得結(jié)果如下:
　　一、實(shí)驗(yàn)選用6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞作為PD體外細(xì)胞模型，在參考前人數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上確定合適的6-OHDA處理濃度，便于后續(xù)研究的展開。濃度為100μmol/L的6-OHDA處理SH-SY5Y細(xì)胞多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，絀胞存活率為62.37±4.41％。因此選擇6-OHDA濃度為100μmol/L作

4、為對SH-SY5Y細(xì)胞的處理濃度。
　　二、選取6種茶葉提取物及2種制備方法制備的EGCG納米粒子(EGCG-(FA+PEG)-NPs-1、EGCG-(FA+PEG)-NPs-2）為試驗(yàn)材料，檢測了上述8種樣品對SH-SY5Y細(xì)胞的毒性作用及對6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果表明，在安全濃度范圍內(nèi)上述8種樣品對6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞可觀察到不同程度的保護(hù)作用;EGCG、茶黃素和EGCG-(FA+P

5、EG)-NPs-1、EGCG-(FA+PEG)-NPs-2對抑制6-OHDA造成的細(xì)胞存活率降低具有較佳的效果。同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)，載有相同含量EGCG的納米粒子EGCG-(FA+PEG)-NPs-1、EGCG-(FA+PEG)-NPs-2與EGCG相比具有更低的毒性和更高的保護(hù)作用效果。
　　三、選取前期試驗(yàn)中對6-OHDA損傷的SH-SY5Y細(xì)胞具較佳保護(hù)作用4種樣品，通過western blot檢測細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量的變

6、化。EGCG、茶黃素及EGCG的納米粒子抑制了6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2，AKT表達(dá)的降低和Bax蛋白表達(dá)的增加。且載有相同EGCG含量的EGCG-(FA+PEG)-NPs效果優(yōu)于EGCG的效果。結(jié)果顯示，茶葉提取物EGCG、茶黃素及EGCG的納米粒子對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制與凋亡蛋白有關(guān)。
　　四、選擇綠茶、紅茶、普洱茶熱水浸出物作為模型藥物，采用熱水浸提法提取茶湯，確定

7、各茶葉中主要熱水浸出物含量，檢測其對SH-SY5Y細(xì)胞的毒性及6-OHDA損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明，綠茶、紅茶、普洱茶茶湯提取物對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞有明顯保護(hù)作用，其中綠茶效果最佳。
　　以上研究顯示，茶葉提取物（EGCG、咖啡堿、L-茶氨酸、茶多酚、茶黃素和茶色素）、EGCG納米粒子及茶熱水浸出物對6-OHDA誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞有不同程度的保護(hù)作用。其中EGCG、茶黃素及EGCG納米粒子的細(xì)胞保護(hù)作用大致