2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、志賀(氏)菌毒素(Shiga toxin)是主要由痢疾志賀菌(Shigella dysenteriae)產(chǎn)生的一種重要的致病毒力因子,由具有酶活性的A亞基和結合作用的B亞基兩部分構成。志賀(氏)菌毒素的受體為鞘糖脂Gb3(globotriaosylceramide),其廣泛存在于哺乳動物細胞膜表面。志賀(氏)菌毒素經(jīng)過復雜的胞吞途徑進入細胞內(nèi)部殺死細胞。志賀(氏)菌毒素與細胞表面的Gb3受體結合后,經(jīng)過逆轉運方式進入內(nèi)質網(wǎng),再由內(nèi)質網(wǎng)最

2、終到達細胞質中。在細胞質之中,志賀(氏)菌毒素的酶活部分使28S rRNA失活,從而抑制蛋白的合成。但是,目前的研究對于毒素在胞內(nèi)轉運的機制還有很多不清楚的地方。 本論文旨在研究志賀(氏)菌毒素B亞基N端的作用,通過基因克隆的方法對B亞基N端進行修飾,并對修飾后B亞基的胞內(nèi)運輸進行研究。 本論文首先以pGlyc-KDEL質粒為模板擴增出STxB的基因序列,并將其連接到帶有GST的pGEX-4T-1骨架載體上,構建原核表達

3、載體GST-STxB-pGEX-4T-1,并在大腸桿菌DH5 α中通過IPTG誘導表達,然后利用谷胱苷肽Sepharose 4B凝膠親和層析對重組的蛋白進行純化。純化的蛋白采用SDS-PAGE和Western blot進行檢測,并且用高效液相Bio-silSEC 250凝膠柱對重組的蛋白進行分析,以確定其多聚體結構。 對重組純化后的GST-STxB蛋白進行了胞內(nèi)運輸?shù)难芯?。首先將N端修飾的蛋白GST-STxB和未做修飾的蛋白ST

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