當歸多糖對巨核細胞造血的影響.pdf

1、目的：血小板減少癥(衄ombocytopenia)是臨床常見的病癥，除了特發(fā)性血小板減少性紫癜外，還常見于再生障礙性貧血、化療、放療和骨髓移植的病人，嚴重影響此類疾病的治療效果。傳統(tǒng)中藥用于治療貧血、血小板減少癥及骨髓抑制等疾病已有數(shù)百年歷史，實踐和經(jīng)驗證明用復方中草藥治療血小板減少癥是安全有效的。傳統(tǒng)中藥當歸具有補血活血的功效，現(xiàn)代研究認為，當歸補血的機理可能與其成分一當歸多糖(APS)促進造血干細胞和祖細胞增殖分化有關，但APS對巨

2、核細胞／血小板造血的影響作用及具體的信號通路尚不清楚。目前國內外還沒有用純化的中草藥成分研究巨核細胞造血的報道，純化的APS尚未用于治療血小板減少癥。本實驗以人巨核細胞系M一07e為研究對象，用純化的APS處理細胞后，觀察APS對巨核細胞生長和凋亡的影響，并從分子水平上探討其作用機制，為進一步應用APS治療血小板減少癥提供現(xiàn)代科學理論依據(jù)。 方法：以巨核系細胞M—07e為研究對象，檢測APS對M．07e細胞增殖和凋亡的影響。實驗

3、分組為：正常培養(yǎng)組(IMDM+10％FBS)、對照組(IMDM)、APS組(IMDM+100μg/mLAPS)、PDGF組(IMDM+50ng/mLPDGF)和TP0組(IMDM+50ng/mLTPO)。在不同時間點檢測各實驗組下列指標：①24、48、72小時分別進行細胞計數(shù)、臺盼藍拒染法測活細胞比率及MTT法檢測細胞增殖情況；②用流式細胞儀分別以AnnexinV、Caspase一3、JC一1三種方法測定細胞凋亡率；③以Westernb

4、lot的方法檢測給予APS(100μg／mL)O、8、16、24、48小時Bax、Bcl．2及Bax/Bcl一2的變化情況。 結果：①APS對巨核系細胞M—07e增殖的影響：細胞計數(shù)及臺盼藍拒染法測細胞活率：在觀察周期內，隨著孵育時間的延長，各組細胞均有增殖(初始接種細胞密度為1．0×105／mL)，APS組細胞數(shù)24、48、72小時分另0增力口至(1．73土O．33)×1O5／mL(P=0．1O，vs．Control)、(2．

5、51士O．52)×105／mL(P=O．011，vs．Contr01)及(4．76±0．53)×105／mL(P=0.0011，vs．Contr01)；活細胞比率分別為94％、90％和85％，都顯著高于對照組(P

6、AnnexinV：APS、PDGF或TP0存在時，M—07e培養(yǎng)72小時，各組中早期凋亡細胞[AnnexinV(AnV)+PI-]的比例分別為(10．4土3．0)％、(9．6±2．2)％和(9．6±3．1)％，與對照組(15．3士3．8)％比較P值分別為O．017、O．026和0．019，都有顯著性差異；培養(yǎng)72小時，全部死細胞(AnV+PI-和AnV+PI+兩群細胞之和)顯著降低，分別為(19．4士7．6)％、(21．4±7．3)％和

7、(18．8士8．O)％，與對照組(34．3土5．5)％比較P值分別為0.0046、O．026和O．016，都有顯著性差異(n=7)。(b)Caspase一3：APS、PDGF和TPO組活化的Caspase一3較對照組明顯減少，分別為(12．3士5．2)％、(12．4士6．3)％和(13．7±8．3)％，和對照組(18．9±6．1)％比較P值分別為0．017、0．025和0．12(n=5)。(c)JC—l結果顯示，三個組全部死亡細胞(R1

8、+R2)分別為(23．6±6．7)％、(28±10．1)％和(28±9．0)％，與對照組(39．5士11．9)％比較P值分別為O．0096、O．074和O．064(n=7)。⑧Westernblot檢測凋亡相關蛋白表達：當給予APS0、8、16、24和48小時，Bax的表達隨著時間的延長而下降，48小時組僅為O小時組的O．28士O．086倍，Bcl一2的表達維持在1．0至1．15土0．32倍之間。48小時內，Bax/Bcl一2的比率從1

9、．02土O．40降至O．27士O．092。 結論：①APS具有促進M一07e細胞增殖的作用，且APS的這種促進巨核細胞生長的作用與經(jīng)典的巨核細胞／血小板生長調節(jié)因子PDGF和TP0類似。②APS能夠抵抗無血清培養(yǎng)誘導的M一07e細胞凋亡，且APS的抗凋亡作用與PDGF和TPO類似，甚至強于二者。③APS的抗凋亡作用機制一方面可能是通過減少Caspase一3的活化和穩(wěn)定線粒體膜而部分實現(xiàn)的；另一方面可能是APS降低無血清培養(yǎng)的M-