AP-1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3細(xì)胞膠原表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、核轉(zhuǎn)錄因子圈套策略(transcription factor decoy strategy,TFDS)是近年來發(fā)明的基因治療方法之一,該方法人工合成雙鏈寡核苷酸片段(oligodeoxynucleotides,ODNs)其中含有與核轉(zhuǎn)錄因子作用的順式元件(cis-element)中的核心序列一致的序列,將該ODNs導(dǎo)入細(xì)胞后,可以和DNA一道競(jìng)爭(zhēng)性地與核轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,從而發(fā)揮競(jìng)爭(zhēng)抑制相應(yīng)核轉(zhuǎn)錄因子的功能,最終達(dá)到基因治療的目的. 基于上

2、述設(shè)想,該課題設(shè)計(jì)合成了靶向AP-1的Decoy-ODNs及無關(guān)序列ODNs,用凝膠遷移變動(dòng)分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)檢驗(yàn)合成的Decoy-ODNs是否可以競(jìng)爭(zhēng)性的抑制AP-1的活性.然后,用陽(yáng)離子脂質(zhì)體包裹熒光標(biāo)記的Decoy-ODNs轉(zhuǎn)染鼠成纖維細(xì)胞株NIH3T3細(xì)胞,觀察其在細(xì)胞中的分布及變化規(guī)律;最后采用逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription

3、 polymerase chain reaction,RT-PCR)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunoadsordent assay,ELISA)從基因水平及蛋白水平研究Decoy-ODNs對(duì)NIH3T3細(xì)胞α<,2>Ⅰ型膠原表達(dá)的調(diào)節(jié),探討AP-1Decoy-ONDs對(duì)病理性瘢痕進(jìn)行基因治療的可行性.結(jié)論:1.Decoy-ODNs在體外可以拮抗AP-1的活性,且這種抑制作用呈濃度依賴性.2.陽(yáng)離子脂質(zhì)體可以有