體外誘導(dǎo)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞樣細(xì)胞分化.pdf

1、目的：研究大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)離體分離和培養(yǎng)方法,探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、表皮生長因子(EGF)和全反式維甲酸(RA)的聯(lián)合誘導(dǎo)劑與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)在體外條件下誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞樣細(xì)胞分化的作用。 方法：成年SD大鼠,雌雄不拘,體重100-120g。在細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)超凈工作臺上取材。用股骨、脛骨灌洗法采集成年大鼠骨髓細(xì)胞,密度梯度離心法分離出骨髓基質(zhì)細(xì)胞。并在體外進(jìn)行培養(yǎng)、擴(kuò)增、消化

2、、傳代,倒置顯微鏡觀測細(xì)胞形態(tài),傳至第3代時(shí),進(jìn)行誘導(dǎo)分化。分為3組:A組:bFGF+EGF+RA聯(lián)合誘導(dǎo)；B組:BMP-7進(jìn)行誘導(dǎo)；C組為空白對照組,不加誘導(dǎo)劑繼續(xù)培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下每日觀察、記錄BMSCs的增殖、誘導(dǎo)分化情況,并應(yīng)用免疫組化技術(shù)對細(xì)胞進(jìn)行神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)檢測。 結(jié)果：用含20％胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)BMSCs,原代細(xì)胞貼壁生長,細(xì)胞形態(tài)均-,為紡錘形,有克隆形成。傳代培養(yǎng)時(shí),形態(tài)變?yōu)槌衫w維

3、細(xì)胞樣,生長特征呈"S"形曲線,有較強(qiáng)的增殖能力。誘導(dǎo)分化可見:A組誘導(dǎo)7天后有部分細(xì)胞具備神經(jīng)元樣細(xì)胞形態(tài),胞體呈錐形或圓形,有較長單極或多極的突起,有NSE陽性細(xì)胞表達(dá)。而B組,C組細(xì)胞仍為典型的成纖維細(xì)胞形態(tài),無NSE陽性細(xì)胞。 結(jié)論：骨髓基質(zhì)細(xì)胞具有較強(qiáng)的自我更新及多向分化能力,在適宜的誘導(dǎo)分化條件下,可誘導(dǎo)分化出神經(jīng)細(xì)胞。bFGF、EGF和RA可以聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞樣細(xì)胞分化,并可調(diào)控神經(jīng)元分化,而BMP-7