2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:觀察三七總皂苷(panax notoginseng saponins, PNS)對B16黑色素瘤轉(zhuǎn)移的作用。同時(shí)進(jìn)一步探明這種作用與其影響 B16細(xì)胞縫隙連接細(xì)胞間通訊(gap junction intercellular communication, GJIC)及縫隙連接蛋白32(Connexin32,Cx32)表達(dá)的關(guān)系和內(nèi)在機(jī)制。
  實(shí)驗(yàn)方法:1.建立B16黑色素瘤自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型 C57BL/6小鼠60只,于小

2、鼠左后肢爪墊皮下注射 B16黑色素瘤細(xì)胞懸液50ul(1×107·ml-1)。建立模型24小時(shí)后,隨機(jī)分成生理鹽水組(NS,0.2 mL·10g-1),PNS(120mg·kg-1)、PNS(240mg·kg-1)、PNS(480mg·kg-1)三個劑量組,每組12只。每日灌胃給藥,給藥體積為0.2 mL·10g-1。(1)接種瘤液后第23天,用0.5%戊巴比妥鈉麻醉小鼠,結(jié)扎股動脈,截除荷瘤下肢,稱重,計(jì)算抑瘤率。(2)切除原發(fā)灶后繼

3、續(xù)給藥三周,于模型建立后第46天處死小鼠,取下小鼠肺臟,觀察肺臟腫瘤轉(zhuǎn)移情況,對肺轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)免疫組化檢測Cx32在黑色素瘤原發(fā)灶的表達(dá)情況,觀察PNS對黑色素瘤原發(fā)灶中Cx32表達(dá)的影響。2.采用劃痕標(biāo)記/染料示蹤技術(shù)(SL/DT),觀察不同濃度 PNS作用 B16細(xì)胞,其 GJIC功能的變化。用分子量為457.2D的熒光黃染料(Lucifer Yellow, LY)標(biāo)記損傷細(xì)胞,通過LY染料在細(xì)胞間的傳遞情況來反映細(xì)胞間的

4、縫隙連接通訊功能。3.免疫印跡(Western blot)檢測Cx32在各組B16細(xì)胞中的表達(dá)情況。4.通過細(xì)胞-基質(zhì)粘附實(shí)驗(yàn),觀察PNS對B16細(xì)胞與基質(zhì)膠(Matrigel)的粘附能力的影響
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.成功建立B16黑色素瘤自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型小鼠于接種腫瘤細(xì)胞后8~12天在接種部位形成黑素沉著斑,之后逐漸增大,突起,形成腫瘤結(jié)節(jié)。于接種瘤液后第23天切除腫瘤,見腫瘤質(zhì)地較軟,黑色,包膜基本完整部分有壞死或潰瘍。HE染色病

5、理組織學(xué)檢查:瘤組織排列結(jié)構(gòu)復(fù)雜,呈巢狀、或彌散分布。細(xì)胞體積大,多邊形,核呈空泡狀,核仁明顯,部分可見核分裂像,腫瘤細(xì)胞內(nèi)含有黑色素顆粒,提示B16-BL6小鼠黑色素瘤自發(fā)性轉(zhuǎn)移模型復(fù)制成功。2. PNS對原發(fā)位黑色素瘤生長的影響 PNS(240mg·kg-1、480mg·kg-1)兩個劑量組,與對照組瘤重相比較具有顯著性差異,腫瘤抑制率分別達(dá)到32.09%和50.85%。3. PNS對黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移的影響通過對小鼠肺轉(zhuǎn)移灶計(jì)數(shù)和評分

6、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后發(fā)現(xiàn),與模型組相比PNS240mg·kg-1、480mg·kg-1兩個劑量組能有效抑制黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移灶數(shù)量和大小與對照組相比有明顯地減少和縮小。4. PNS對黑色素瘤細(xì)胞膜上Cx32的表達(dá)的影響免疫組織化學(xué)檢測并對染色結(jié)果進(jìn)行分級,經(jīng)分析后得到的結(jié)果顯示:PNS各用藥組中的黑色素瘤原發(fā)灶腫瘤細(xì)胞膜上Cx32的表達(dá)均得到了增強(qiáng)。5. PNS對B16細(xì)胞的縫隙連接通訊功能的作用采用劃痕標(biāo)記/染料示蹤技術(shù)(SL/DT

7、)在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)不同劑量的PNS(100μg·ml-1、200μg·ml-1、400μg·ml-1)在不同程度上提高了B16細(xì)胞間的GJIC功能。隨PNS濃度增高,LY染料傳輸范圍逐漸增大,最遠(yuǎn)可達(dá)劃痕旁3~4層細(xì)胞。6. PNS對B16細(xì)胞中Cx32的表達(dá)量的影響 Western blot的檢測結(jié)果顯示PNS各劑量組與對照組比較Cx32的表達(dá)量無明顯變化。7. PNS對B16細(xì)胞與基質(zhì)的粘附能力的影響通過細(xì)胞-基質(zhì)粘附實(shí)

8、驗(yàn)結(jié)果計(jì)算腫瘤細(xì)胞的相對粘附率,結(jié)果顯示PNS能夠抑制 B16細(xì)胞的基質(zhì)粘附能力。同時(shí)發(fā)現(xiàn)GJ功能增強(qiáng)劑維甲酸鈉(all trans-retinoic acid,RA)同樣具有抑制 B16細(xì)胞與基質(zhì)粘附能力的作用,表明GJ功能的上調(diào)和恢復(fù)能夠影響腫瘤細(xì)胞的基質(zhì)粘附能力。PNS對B16細(xì)胞的基質(zhì)粘附能力的抑制作用可能與其上調(diào)腫瘤細(xì)胞間的GJ功能有關(guān)。
  實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
  1. PNS能夠抑制B16黑色素瘤的生長和轉(zhuǎn)移。

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