氨氯地平對小鼠黑色素瘤B16的抗轉(zhuǎn)移作用及對MMP-9和TIMP-1表達(dá)的調(diào)節(jié).pdf

1、目的:觀察氨氯地平對小鼠黑色素瘤B16的抗轉(zhuǎn)移作用及對MMP-9和HMP-1表達(dá)的調(diào)節(jié),探討其抗腫瘤轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
　　 方法:MTT檢測氨氯地平對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的生長抑制率,以測算其IC50值;并將腫瘤細(xì)胞置于1/2 IC50和IC50的氨氯地平中和無氨氯地平中的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48h后分別收集上清液,用明膠酶譜法檢測MMP-9的蛋白水平;建立C57BL/6J小鼠黑色素瘤B16的自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型,隨機(jī)分為5組:陰性對照組

2、,陽性對照環(huán)磷酰胺組(CTX)(20mg/kg.2d)腹腔注射7次,氨氯地平高(10 mg/kg.d)、中(3 mg/kg.d)、低(1 mg/kg.d)劑量治療組灌胃給藥21天。對各組腫瘤進(jìn)行稱重,計數(shù)肺表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù),計算腫瘤生長抑制率和轉(zhuǎn)移抑制率;采用明膠酶譜法、免疫組化、RT-PCR方法檢測MMP-9,TIMP-1在腫瘤組織中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1)與對照組比較氨氯地平可明顯抑制小鼠黑色素瘤B16的增殖,并呈明顯

3、的劑量和時間依賴性;(2)明膠酶譜法檢測腫瘤組織中MMP-9的含量,實驗組酶原型MMP-9的含量均較陰性對照組低,然而沒有檢測到上清液中MMP-9;(3)氨氯地平可以呈劑量依賴性的抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的體內(nèi)增殖和自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移;(4)免疫組化顯示,陰性對照組MMP-9染色呈深棕色,而氨氯地平組染色強(qiáng)度明顯降低,TIMP-1實驗組染色強(qiáng)度均較陰性組高,差異有顯著意義;(5)RT-PCR實驗結(jié)果表明氨氯地平能使瘤組織中MMP-9mRNA