構(gòu)建和表達(dá)抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶的融合蛋白.pdf

1、單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）分為單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和單純皰疹病毒Ⅱ型(HSV-2)兩種類型，可以感染皮膚、黏膜以及多種器官。絕大多數(shù)生殖器皰疹（genital herpes，GH）是由HSV-2感染引起，但由HSV-1感染引起的GH比例在增加。HSV-2感染目前是不可治愈的，主要通過性接觸水平傳播和母嬰垂直傳播，傳染性極強(qiáng)且會(huì)反復(fù)發(fā)作，皰疹發(fā)作產(chǎn)生的潰瘍是生殖器潰瘍的主要病因之一，流行病學(xué)

2、證據(jù)表明HSV-2感染與宮頸癌和人類免疫缺陷病毒(HIV)感染都有密切的關(guān)系。HSV-2在人群中有著很高的感染率和發(fā)病率，世界衛(wèi)生組織發(fā)布的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示2003年全球15歲至49歲年齡段人群中，HSV-2感染率約為16.2％，發(fā)病率約為0.7％，并且都有不斷上升的趨勢(shì)。因此，建立一種簡(jiǎn)便、快速、低成本的HSV-2初篩方法，對(duì)GH的輔助診斷和控制傳播具有重要的意義。
　　為探索本實(shí)驗(yàn)室前期篩選到的特異性抗HSV-2糖蛋白B的單鏈抗體

3、在GH診斷中的實(shí)用價(jià)值，本研究將該單鏈抗體基因克隆入原核表達(dá)載體pLac-duet-1-AKP中構(gòu)建了抗HSV-2單鏈抗體和堿性磷酸酶的融合表達(dá)載體pLac-H3-AKP，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)獲得表達(dá)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE顯示在破菌沉淀中有符合預(yù)期大小的約75kD大小的新生蛋白帶。將包涵體裂解后用鎳離子螯合層析純化變性的融合蛋白，并初步探索出該融合蛋白的最佳復(fù)性條件:復(fù)性緩沖液（50mmol/LTris-HCl，