苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒新增效蛋白的研究.pdf

1、昆蟲病原病毒具有殺蟲效果專一、持久、無(wú)抗藥性，對(duì)人、畜及高等植物無(wú)害等特點(diǎn)，并且能在害蟲種群中形成流行病而長(zhǎng)期控制蟲口，從保持生態(tài)平衡和減小化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境污染戰(zhàn)略考慮，作為生物殺蟲劑的開發(fā)和應(yīng)用頗具潛力。但病毒殺蟲劑的應(yīng)用尚存在以下三個(gè)問(wèn)題：一是殺蟲范圍窄，二是作用速度較慢，三是殺蟲效果不夠穩(wěn)定，大大限制了病毒殺蟲劑的大面積生產(chǎn)應(yīng)用，如何提高病毒殺蟲效果一直是病毒殺蟲劑研究的重要課題之一。 本實(shí)驗(yàn)是將苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒(

2、AcMNPV)與粘蟲痘病毒(PsEPV)混合侵染三齡末東方粘蟲，發(fā)現(xiàn)AcMNPV能顯著提高PsEPV的致病力。當(dāng)每頭幼蟲接入1.0×104OBs的AcMNPV和1.0×107OBs的PsEPV的混合液時(shí)，幼蟲的死亡率為95.00﹪。而單獨(dú)用1.0×107OBs/蟲AcMNPV處理時(shí)，則幼蟲不感染；單獨(dú)用1.0×107OBs/頭PsEPV處理時(shí)，只獲得46.33﹪的死亡率。 將AcMNPV多角體蛋白與病毒粒子分離后進(jìn)一步測(cè)定，發(fā)現(xiàn)

3、單獨(dú)用1.0×106OBs/蟲PsEPV侵染三齡東方粘蟲時(shí)，幼蟲不被感染，而用同樣濃度再混以AcMNPV多角體蛋白或病毒粒子時(shí)，則會(huì)有41.67﹪和36.67﹪的死亡率，說(shuō)明多角體蛋白或是病毒粒子的包涵體蛋白是產(chǎn)生增效作用的重要因子。 為進(jìn)一步確定AcMNPV對(duì)PsEPV增效作用機(jī)理，分別用1.0×107OBs/蟲PsEPV、1.0×104OBs/蟲AcMNPV和1.0×107OBs/蟲PsEPV與1.0×104OBs/蟲AcM

4、NPV混合飼喂5齡粘蟲，分別處理30min，8h，36h后，取圍食膜(peritrophicmembrane，PM)，進(jìn)行SDS-PAGE分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)單獨(dú)飼喂PsEPV30min圍食膜沒有變化；處理8h，106.00kDa和54.20kDa蛋白條帶消失，直到處理36h，圍食膜沒有新變化。而當(dāng)PsEPV與AcMNPV混合感染時(shí)，圍食膜破壞嚴(yán)重。處理30min，106.00kDa和54.20kDa蛋白條帶消失；處理8h，170.00k

5、Da，106.00kDa、54.20kDa，51.80kDa和23.65kDa蛋白條帶消失；處理36h，170.00kDa，106.00kDa、54.20kDa、51.80kDa、23.65kDa和21.00kDa蛋白條帶消失。 取健康5齡粘蟲的圍食膜，體外用1.0×104OBsAcMNPV/PM處理，分別于30min，8h，36h后取出圍食膜，SDS-PAGE檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，體內(nèi)處理與體外處理結(jié)果相似。36h后共有170.00