AFMC對(duì)TRAI誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察5-烯丙基-7-二氟甲氧基白楊素(AFMC)與腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)合用對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的影響。并探討其機(jī)制是否涉及死亡受體5(DR5)的上調(diào)。
　　 方法:體外培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞和永生化二倍體人胚肺WI-38細(xì)胞。全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性。流式細(xì)胞術(shù)(FCM)定量分析細(xì)胞凋亡率。DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察細(xì)胞DNA核小體間斷裂。Western Blot

2、ing檢測(cè)細(xì)胞DR5蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:通過(guò)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液LDH活性的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,AFMC、TRAIL對(duì)A549細(xì)胞毒性的半數(shù)有效濃度(EC50值)分別為13μmol/L、1850 ng/mL,1.0μmol/L AFMC預(yù)孵育30 min,再加入TRAIL處理24 h,EC50值為36 ng/mL,合并用藥效應(yīng)指數(shù)(CI)值為0.076。白楊素(5,7-二羥基黃酮,ChR)對(duì)A549細(xì)胞毒性EC50為266μm

3、ol/L,10μmol/LChR與TRAIL合用的EC50值為45 ng/mL,CI值為0.004。單用亞毒性濃度的AFMC(1.0μmol/L)、TRAIL(30 ng/mL)或者兩者合用對(duì)WI-38細(xì)胞毒性分別為(7.21±1.38)％、(6.52±1.25)％、(6.66±1.29)％,與溶媒組(0.2％ DMSO,(5.34±1.13)％)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn):AFMC((1.0μmol/L))、TRA

4、IL((30 ng/mL))以及兩者合用24h,A549細(xì)胞凋亡率即亞二倍體DNA含量細(xì)胞(sub-G1)百分率分別為(2.53±0.35)％、(2.69±0.52)％、(37.80±1.78)％。其中AFMC((1.0μmol/L))和TRAIL((30 ng/mL))聯(lián)用24h,A549細(xì)胞sub-G1百分率在作用12 h后開(kāi)始增加,24 h達(dá)高峰。DR5特異性阻斷劑DR5/Fc嵌合蛋白(1μg/mL)能使亞毒性濃度的AFMC與TR

5、AIL合用的A549細(xì)胞凋亡率從(37.80±1.78)％下降到(7.61±0.32)％；而AFMC((1.0μmol/L))、TRAIL((30 ng/mL))以及兩者合用24 h處理WI-38細(xì)胞凋亡率分別為(0.31±0.08)％、(0.29±0.05)％、(0.35±0.12)％。與溶媒組(0.2％DMSO,(0.31±0.05)％)比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示:AFMC(1.0μmol/L)聯(lián)合TRAIL(

6、30 ng/mL)處理A549細(xì)胞24 h,展示出典型DNA梯形條帶圖譜。Western Blot分析的結(jié)果發(fā)現(xiàn):AFMC呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性上調(diào)A549細(xì)胞DR5表達(dá)水平,DR5/Fc嵌合蛋白能有效阻斷AFMC對(duì)DR5表達(dá)的上調(diào)效應(yīng)。而AFMC對(duì)WI-38細(xì)胞DR5表達(dá)無(wú)明顯影響。
　　 結(jié)論:
　　 1.亞細(xì)胞毒性濃度的AFMC具有選擇性增強(qiáng)TRAIL對(duì)A549細(xì)胞毒性作用,其作用強(qiáng)于先導(dǎo)化合物ChR。