兔甲狀腺近全切除術+131I清甲后短期甲減對動脈內膜損傷及阿托伐他汀干預研究.pdf

1、目的:
　　 1、通過對兔行甲狀腺近全切除術+131(I)清甲建立短期甲狀腺功能減退的動物模型。
　　 2、觀察短期甲減對動脈內膜形態(tài)的影響，探討eNOS、ET-1表達在動脈內膜損傷中的作用。
　　 3、觀察阿托伐他汀對甲減狀態(tài)動脈內膜損傷的保護作用。
　　 方法:
　　 1、本實驗選用新西蘭大白兔60只，雌雄各半，中位周齡9.2周（8～10周），平均體重1.7Kg(1.5～2.0Kg)。實驗動物

2、飼養(yǎng)于河北省人民醫(yī)院動物室，給予標準飼料，飲用自來水，室內溫度15～25℃，濕度50％～60％，12h光照/12h暗循環(huán)。根據性別、周齡及體重隨機分成三組:(1)假甲狀腺切除術組（sham thyroidectomy group，ST組），行甲狀腺暴露后即刻縫合;(2)甲狀腺近全切除術組(Near-total thyroidectomy group，NT組)，行甲狀腺近全切除術（單側甲狀腺全切+對側甲狀腺切除90％）;(3)甲狀腺近全切

3、除術+阿托伐他汀鈣干預組（Near-total thyroidectomy and Atorvastatin treatment group，NT+A組），行甲狀腺近全切除+阿托伐他汀治療。手術麻醉用10％水合氯醛，劑量2mL/Kg。NT+A組術后3天內開始給予阿托伐他汀鈣混懸液灌胃，劑量為每日5mL/Kg(即阿托伐他汀鈣7.5mg/Kg)。余各組給予蒸餾水灌胃。各組兔每3天稱重一次。NT組和NT+A組，術后22天(P2點后1天)給予1

4、31(I)清除殘余甲狀腺功能。
　　 2、各處理時間點:(1)分別于P1點（手術前1天）、P2點（手術后3周、131(I)治療前1天）、P3點（手術后5周，131(I)治療后2周）取耳中動脈采血5ml，3000轉/分離心10分鐘取上清液，并放置-70℃冰箱保存待測。(2)分別于P2點、P3點給予各組兔0.1mCi131(I)腹腔注射，24h后行甲狀腺顯像。(3)術后22天(P2點后1天)給予NT組和NT+A組兔耳緣靜脈注射131

5、(I)(1.0mCi/Kg)，清除殘余甲狀腺功能。(4)于手術后36天(P3點后1天）處死所有試驗兔，取升主動脈。
　　 3、分別采用酶聯免疫(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法測定各組兔血清促甲狀腺激素(TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血清內皮

6、素-1(endothelin-1，ET-1)，采用硝酸還原酶法測定兔血清一氧化氮(NO)，以及制作兔升主動脈病理切片觀察兔動脈內膜變化并利用免疫組織化學技術（Immunohistochemistry，IHC）測定兔動脈內皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、ET-1的表達情況。
　　 4、所有統(tǒng)計結果均經統(tǒng)計軟件SPSS13.0處理，以P＜0.05為有顯著性差異。

7、>　　 結果:
　　 1、各處理組兔試驗期間存活良好，直到實驗結束沒有意外死亡。
　　 2、升主動脈形態(tài)學觀察
　　 2.1、大體標本:肉眼觀察各組動脈形態(tài)無明顯差異。
　　 2.2、病理學觀察:①ST組:升主動脈內膜均無異常形態(tài)學變化;②NT組:術后5周20例中有7例主動脈內膜呈脂紋樣變，內皮下有較多吞噬脂質的泡沫細胞;有1例出現纖維斑塊樣改變，內膜增厚，其中有大量吞噬脂質的泡沫細胞;其余12例無異常

8、形態(tài)改變;③NT+A組:術后5周20例中有3例主動脈內膜呈脂紋樣變，可見主動脈內膜脂質條紋，內膜輕度增厚，其中有吞噬脂質的泡沫細胞;其余17例無異常形態(tài)改變。
　　 3、各血清學檢測指標結果比較
　　 3.1、各處理組甲狀腺功能比較
　　 3.1.1、TSH水平:①時間因素、分組因素以及時間因素和分組的交互作用均有統(tǒng)計學意義，（F值范圍介于80.778～750.247之間;P＜0.001）;②每個分組在3個時間點

9、上的兩兩比較:ST組各時間點TSH水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);NT組與NT+A組各時間點TSH水平手術后隨時間延長逐漸升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　 3.1.2、FT3、FT4水平:①ST組各時間點FT3、FT4水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);②與術前相比，術后3周時NT組和NT+A組FT3、FT4水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(t值介于20.239和25.978;P＜0.01);③術后5周時

10、NT組NT+A組FT3、FT4均未測出。
　　 3.2、血脂水平比較
　　 3.2.1、時間、分組因素的作用以及時間和分組之間的交互作用:①TG、TC、LDL-C結果:時間因素、分組因素及時間因素和分組的交互作用均有統(tǒng)計學意義，(F值介于3.998～23.687;P＜0.05);②HDL-C結果:時間因素、分組因素以及時間因素和分組的交互作用均無統(tǒng)計學意義。
　　 3.2.2、每個分組在3個時間點上的兩兩比較:①

11、ST組:各時間點TG、TC、HDL-C、LDL-C水平差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);②NT組:各時間點TG、TC、LDL-C水平隨手術時間延長逐漸升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);術后5周HDL-C水平與術前相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);③T+A組:術后3周和術后5周TG水平均與術前明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);術后3周LDL-C水平與術前相比有明顯差異(P＜0.05)。
　　 其余

12、各項結果比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 3.3、血清NO、ET-1水平比較
　　 3.3.1、時間因素、分組因素及時間因素和分組的交互作用有統(tǒng)計學意義，(F值范圍介于5.452～133.765之間;P＜0.01)。
　　 3.3.2、每個分組在3個時間點上的兩兩比較:①ST組:術后3周和術后5周NO水平與術前相比明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);術后5周ET-1水平與術前和術后3周相

13、比明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。②NT組:各時間點NO水平手術后隨時間延長逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);術后3周和術后5周ET-1水平與術前相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。③NT+A組各時間點NO、ET-1水平差別均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4、免疫組化各檢測指標結果比較
　　 4.1、eNOS、ET-1的表達結果:鏡下陽性表達的切片中胞漿和胞核均有著色，呈棕褐

14、色，其中胞漿著色較明顯，可成片狀。eNOS表達主要見于ST組和NT+A組動脈切片，而NT組只有少量表達或不表達;ET-1表達主要見于NT組和NT+A組，而ST組只有少量表達或不表達。
　　 4.2、eNOS、ET-1的統(tǒng)計結果
　　 4.2.1、多個獨立樣本非參數檢驗:各處理組eNOS、ET-1結果比較差異均有統(tǒng)計學意義(H=10.198和H=13.572，P＜0.01)。
　　 4.2.2、兩個獨立樣本非參數檢

15、驗:與ST組比較，NT組eNOS表達明顯降低、ET-1表達明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(Z=-3.087和Z=-3.722，P＜0.01)。其余各項結果比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 5、甲狀腺放射顯像:與ST組比較，術后3周NT組和NT+A組甲狀腺顯像明顯減低;術后5周NT組和NT+A組甲狀腺顯像不明顯或未見甲狀腺顯像，此為131(I)清甲治療后殘余甲狀腺攝碘率下降所致。
　　 結論: