小兒麻藤定喘方的物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、中藥復(fù)方化學(xué)組成極其復(fù)雜，中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究是中醫(yī)藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵。中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明，有助于促進中藥學(xué)科發(fā)展，建立科學(xué)規(guī)范的中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，加快中藥產(chǎn)業(yè)國際化的步伐?！耙合鄬游龃?lián)多級質(zhì)譜儀”(LC-MS/MS)分析技術(shù)是研究中藥復(fù)方效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)強有力的工具。該技術(shù)具有高效、快速、樣品用量少等優(yōu)點，能同時對復(fù)雜的中藥組成進行定性和定量分析。本文以整體動物平喘藥理為導(dǎo)向，在對組方各味藥平喘有效部位進行篩選的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)有研究成果

2、和現(xiàn)代制藥生產(chǎn)技術(shù)，對小兒麻藤定喘方有效成分群的提取分離、純化工藝進行了研究，運用“LC-MS/MS”分析技術(shù)研究小兒麻藤定喘方的物質(zhì)基礎(chǔ)，并采用高效液相色譜法建立有效成分群中君藥麻黃平喘有效成分麻黃堿的含量測定方法，有助于建立科學(xué)規(guī)范的中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，為小兒麻藤定喘創(chuàng)新藥物的臨床應(yīng)用與開發(fā)奠定了堅實的基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 第一部分：組方各味藥平喘有效部位的篩選
　　 一、苦杏仁平喘有效部位的篩選及有效

3、成分的結(jié)構(gòu)鑒定
　　 目的：比較苦杏仁不同部位對乙酰膽堿組胺引起的豚鼠哮喘的作用及鑒定有效部位柱分離得到的有效成分。
　　 方法：采用乙酰膽堿和組胺混合液致豚鼠哮喘發(fā)作，觀察哮喘潛伏期。運用先進的LC-MS/MS分析技術(shù)鑒定有效成分結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果：苦杏仁的正丁醇部位及其柱分離結(jié)晶C、D均可明顯延長哮喘發(fā)作潛伏期。
　　 結(jié)論：苦杏仁的正丁醇部位是其平喘的主要活性部位，經(jīng)鑒定，柱分離得到的有效結(jié)晶C和D

4、都是苦杏仁苷。
　　 二、地龍?zhí)崛∥镏鶎游銎酱行Р课坏暮Y選
　　 目的：比較地龍?zhí)崛∥镏鶎游龈鞑课坏钠酱钚浴?br>　　 方法：采用乙酰膽堿和組胺混合液致豚鼠哮喘發(fā)作，觀察哮喘潛伏期。
　　 結(jié)果：5％-15％甲醇的乙酸乙酯洗脫部位可明顯延長哮喘發(fā)作潛伏期。
　　 結(jié)論：5％-15％甲醇的乙酸乙酯洗脫部位是中藥地龍平喘的主要活性部位。
　　 三、鉤藤、僵蠶、甘松平喘有效部位的篩選
　　

5、 目的：比較鉤藤、僵蠶、甘松不同部位對乙酰膽堿組胺引起的豚鼠哮喘的作用。
　　 方法：采用乙酰膽堿和組胺混合液致豚鼠哮喘發(fā)作，觀察哮喘潛伏期。
　　 結(jié)果：鉤藤、僵蠶、甘松的乙酸乙酯部位均可明顯延長哮喘發(fā)作潛伏期。
　　 結(jié)論：鉤藤、僵蠶、甘松的乙酸乙酯部位是它們平喘的主要活性部位。
　　 第二部分：小兒麻藤定喘方有效成分群的水提醇沉工藝研究
　　 目的：探討小兒麻藤定喘方有效成分群的水提醇沉工

6、藝條件。
　　 方法：以麻黃堿含量和浸膏得率為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測定麻黃堿的含量，運用正交試驗法對水提及醇沉的工藝條件進行優(yōu)化；采用乙酰膽堿和組胺混合液致豚鼠哮喘發(fā)作，觀察哮喘潛伏期，通過藥效驗證最佳工藝。
　　 結(jié)果：水提最佳工藝為：第一次補足吸水量后加10倍量水浸泡2小時，其余每次加10倍量水，提取3次，每次提取1.5小時；醇沉最佳工藝為：醇沉濃度為60％，濃縮比例為1∶1.5，靜置時間為24h；按此工藝條件提

7、取的提取物可明顯延長哮喘發(fā)作潛伏期。
　　 結(jié)論：優(yōu)選的工藝穩(wěn)定、可行。
　　 第三部分：小兒麻藤定喘方水煮醇沉提取物大孔吸附樹脂純化的活性部位篩選
　　 目的：確定小兒麻藤定喘方水煮醇沉提取物大孔吸附樹脂純化的平喘活性部位。
　　 方法：采用乙酰膽堿和組胺混合液致豚鼠哮喘發(fā)作，觀察哮喘潛伏期；采用高效液相色譜法測定君藥麻黃有效成分麻黃堿的含量。
　　 結(jié)果：70％和95％乙醇洗脫部位可明顯延長哮

8、喘發(fā)作潛伏期；70％乙醇洗脫部位麻黃堿含量為37.14mg/g、95％乙醇洗脫部位麻黃堿含量為2.064mg/g。
　　 結(jié)論：70％和95％乙醇洗脫部位是小兒麻藤定喘方平喘的主要活性部位。
　　 第四部分：小兒麻藤定喘方有效成分群的化學(xué)成分研究
　　 目的：研究小兒麻藤定喘方有效成分群的化學(xué)組成。
　　 方法：采用先進的LC-MS/MS分析技術(shù)對有效成分群進行分析研究。
　　 結(jié)果：參考相關(guān)文獻(xiàn)

9、，結(jié)合色譜保留時間、紫外吸收光譜、分子量和多級質(zhì)譜信息等，從有效成分群中初步鑒定了17個化合物，分別是：麻黃堿、鉤藤堿、毛鉤藤堿、硬帽毛柱木堿、帽杜木堿、甲基麻黃堿、去甲麻黃堿、去氫毛鉤藤堿、硬帽毛柱木因堿、柯諾辛、科諾辛B、甘松新酮、甘松香酮、甘松酮、亞油酸、喜果苷、琥珀酸二異丁酯等。
　　 結(jié)論：建立了小兒麻藤定喘方有效成分群的化學(xué)特征譜(包括正、負(fù)離子總圖、DAD檢測光譜圖)，基本表征了小兒麻藤定喘方的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　

10、　 第五部分：小兒麻藤定喘方有效成分群中鹽酸麻黃堿的含量測定
　　 目的：建立小兒麻藤定喘方有效成分群中鹽酸麻黃堿含量測定的方法。
　　 方法：采用HPLC法測定。色譜柱：Aglient TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動相：乙腈-0.1％磷酸水溶液(4∶96)；流速：1.0ml/min；檢測波長：210 nm；柱溫：35℃；進樣量：10μl。
　　 結(jié)果：線性關(guān)系良好，r=0.9999，回