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1、目的:通過(guò)對(duì)腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子BDNF、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子GDNF、軸突生長(zhǎng)抑制因子Nogo-A等在基因和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況的檢測(cè),來(lái)評(píng)估神經(jīng)絲氨酸蛋白酶抑制劑(neuroserpin,NSP)對(duì)急性脊髓損傷大鼠進(jìn)行干預(yù)后大鼠的神經(jīng)功能的恢復(fù)情況并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。
方法:成年雄性SD大鼠隨機(jī)分成三組。A.脊髓損傷(SCI)組:60只。用改良Allen's重物打擊法制備急性脊髓損傷模型,以30g.cm致傷力損傷大鼠
2、T11對(duì)應(yīng)脊髓,鞘內(nèi)注射生理鹽水25μ l。B.NSP組:60只。大鼠急性脊髓損傷后立即鞘內(nèi)注射N(xiāo)SP25μ L。C.正常對(duì)照組:10只。只去除椎板,暴露脊髓,不造成SCI。各組定期行為學(xué)觀察(BBB評(píng)分),western blot檢測(cè)脊髓損傷局部GDNF、Nogo-A的表達(dá),realtime PCR檢測(cè)脊髓損傷局部BDNF、GDNF、Nogo-A的表達(dá)情況。
結(jié)果:隨時(shí)間延長(zhǎng),術(shù)后SCI組和NSP組大鼠BBB評(píng)分均逐漸升高,
3、但是兩組并無(wú)明顯差異。
Western blot顯示:在正常成年大鼠脊髓內(nèi)GDNF表達(dá)很少,急性脊髓損傷后1d GDNF表達(dá)明顯升高,隨時(shí)間延長(zhǎng),其表達(dá)量逐漸降低,14d時(shí)稍微高于正常對(duì)照組,同時(shí),在1d、3d、7d、14d各時(shí)間點(diǎn)NSP組GDNF表達(dá)量均高于SCI組。Nogo-A在正常成年大鼠脊髓內(nèi)的表達(dá)量也是比較少,急性脊髓損傷后其表達(dá)成逐漸升高趨勢(shì),14d時(shí)表達(dá)最強(qiáng),同時(shí),NSP組在各時(shí)間點(diǎn)的Nogo-A表達(dá)量均低于SC
4、I組。
Realtime PCR顯示:BDNF在正常組表達(dá)極少,脊髓損傷1d后表達(dá)水平顯著提高,隨時(shí)間推移,表達(dá)水平逐漸下降,但總是高于正常組,同時(shí),NSP組在1d、3d、7d、14d各時(shí)間點(diǎn)BDNF水平均明顯低于SCI組;GDNF在正常組表達(dá)極少,脊髓損傷1d后表達(dá)水平顯著提高,隨時(shí)間推移,表達(dá)水平逐漸下降,但總是高于正常組,同時(shí),NSP組在1d、3d、7d各時(shí)間點(diǎn)GDNF水平均明顯高于SCI組;Nogo-A在正常組少量表達(dá)
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