人體細胞綿羊卵細胞克隆胚的構(gòu)建及類ESc的分離.pdf

1、本研究采用組織塊培養(yǎng)法建立人胎兒皮膚成纖維細胞系，對培養(yǎng)的F12、F20代細胞進行核型分析，發(fā)現(xiàn)85.6％、83.3％的細胞染色體核型保持正常的倍數(shù)(2n=46)。 以人胎兒成纖維細胞作為核供體，體外成熟培養(yǎng)的綿羊卵母細胞為核移植受體，構(gòu)建了人—綿羊異質(zhì)重構(gòu)胚。發(fā)現(xiàn)H33342熒光輔助去核法與盲吸法對重構(gòu)胚的融合率及卵裂率無顯著差距(P＞0.05)，但桑椹胚的發(fā)育率以盲吸法較高(52.38％對71.85％)。 以帶下注射

2、法及胞質(zhì)內(nèi)注射法構(gòu)建重構(gòu)胚其卵裂率(66.66％、71.42％)及桑椹胚的發(fā)育率(52.38％、47.62％)，沒有明顯差別(P＞0.05)；但與總操作卵比較，胞質(zhì)內(nèi)注射效率明顯高于帶下注射(47.62％、21.78％)。進行帶下注射電融合時，發(fā)現(xiàn)在電壓為1.5KV/cm時，融合率低于1.6KV/cm及1.7KV/cm(41.58％對57.69％、56.52％)，但重構(gòu)配的桑椹胚發(fā)育率以1.6KV/cm(40％對52.38％、53.85