藍豬耳精、卵細胞，中央細胞，助細胞以及原胚細胞的分離.pdf

1、高等植物的雌性配子細胞深藏在子房內的胚珠體細胞組織中，形成了對高等植物受精機理研究的障礙。而將高等植物的精、卵細胞和其他雌配子體細胞分離出來，在體外誘導精、卵細胞的融合以及對人工合子和其他分離得到的雌配子細胞體外進行細胞學和分子生物學的研究可克服這種障礙，達到研究高等植物受精機理的目的。分離的雌、雄配子、合子以及早期胚細胞結合分子生物學方法研究這些細胞的結構和功能已成為一個新的研究領域。藍豬耳(Torenia fournieri)具有胚

2、囊半裸露的特點，近幾年來逐漸成為研究植物受精生物學的一種模式植物。在我們的實驗中，我們分離了一定數量具有生活力的精、卵細胞、中央細胞、助細胞、以及二胞原胚中的頂細胞與基細胞。 1.藍豬耳精細胞分離：藍豬耳成熟花粉是二胞型。我們采用活體-離體技術培養(yǎng)了藍豬耳的花柱使其長出花粉管，然后用滲透壓沖擊法促使花粉管尖端破裂，釋放出一對與營養(yǎng)核相連的精細胞。通過對45對精細胞直徑大小進行單因素方差分析發(fā)現，藍豬耳的一對精細胞在體積上呈顯著差

3、異，具有二型性。并首次發(fā)現，爆破出的兩個精細胞的生活力也是有所差異的，經FDA染色時發(fā)現，和營養(yǎng)核相連大的精細胞(Svn)的熒光明顯弱于小的精細胞(Sua)。對大小兩個精細胞進行了群體的收集。 2.藍豬耳卵細胞和合子分離：在準確掌握了藍豬耳胚囊發(fā)育的時期和授粉至受精時間的基礎上，分離出大量生活狀態(tài)良好的卵細胞與合子；觀察了體內卵細胞與助細胞受精前后的一些細胞學變化；對于體內合子從受精起始到分裂為二胞原胚的一系列變化也進行了觀察。

4、同時還發(fā)現花粉管進入胚囊后，在藍豬耳胚珠內部形成了一條淀粉粒帶，而在受精前的胚珠中完全不存在這條淀粉粒條帶，這是由受精引起的雌性器官內部營養(yǎng)物質的變化。我們首次對高等植物分離后的卵細胞與合子進行電泳，發(fā)現卵細胞與合子表面都帶正電荷。在電場作用下，細胞的移動速度主要取決于其表面電荷的多少。在實驗中，合子的移動速度比卵細胞快，暗示受精后，合子所帶的表面電荷增加。卵細胞與合子的大量分離為高等植物受精機理的研究創(chuàng)造了條件。 3.藍豬耳中

5、央細胞和助細胞分離：在對以上分離技術不斷完善和改進的基礎上，我們分離出了受精前后的中央細胞以及不同時期的助細胞。結果發(fā)現，受精前后的中央細胞在體積與細胞狀態(tài)均有很大差異，受精前的中央細胞體積較小，含有很多大液泡，且細胞內部的淀粉粒較少；而受精后的中央細胞體積變大，液泡減少，細胞內部充滿了淀粉粒。通過比較不同發(fā)育時期的助細胞，發(fā)現兩個助細胞只是在體積上略有差異，而在細胞狀態(tài)上看不出任何差異。 4.藍豬耳二胞原胚的頂細胞和基細胞分離