再生障礙性貧血患兒骨髓MSC造血支持作用與免疫抑制作用的研究.pdf

1、目的：體外分離、培養(yǎng)骨髓MSC，研究再障患兒骨髓MSC的造血支持作用和免疫抑制作用。 方法：采集24例再障患兒和20例對照的骨髓標本，分離、培養(yǎng)和擴增MSC，進行細胞形態(tài)觀察及增殖能力檢測，對骨髓MSC進行成纖維細胞集落形成單位(CFU-F)分析；應(yīng)用MTT法檢測骨髓MSC黏附造血細胞的能力；采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測骨髓MSC細胞培養(yǎng)上清中SCF的濃度；對骨髓MSC進行貼壁培養(yǎng)，接種骨髓單個核細胞(mononucl

2、ear cell，MNC)，觀察擴增細胞數(shù)和擴增后MNC形成的BFU-E、CFU-GM、CFU-GMME；采用混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)檢測骨髓MSC對淋巴細胞的免疫抑制能力；采用RT-PCR半定量分析骨髓MSC細胞內(nèi)TGF-β1和HGF mRNA的表達水平；采用ELISA檢測骨髓MSC細胞培養(yǎng)上清中TGF-β1和HGF的濃度。 結(jié)果：1.再障患兒骨髓MSC呈現(xiàn)典型的成纖維細胞形態(tài)，三代以前與對照相似；再障患兒骨髓MSC第一代與

3、第三代的傳代時間延長，CFU-F計數(shù)(1 5.70±5.78)顯著低于對照組骨髓MSC的CFU-F計數(shù)(21.73±5.74)，t=-2.94，P＜0.05；2.再障患兒骨髓MSC對造血細胞的黏附率[(59.65±15.52)％]較對照組黏附率[(68.18±15.53)％]無顯著差異，t=-1.48，P＞0.05；3.再障患兒骨髓MSC培養(yǎng)上清@SCF的濃度[(30.69±16.82)pg/ml]顯著低于對照組骨髓MSC培養(yǎng)上清中SC

4、F的濃度[(50.74±14.83)pg/ml]，t=-3.28，P＜0.01；4.再障患兒骨髓MSC支持下的MNC細胞擴增總數(shù)和擴增后MNC的集落形成能力，BFU-E、CFU-GM、CFU-GMME計數(shù)[(1.35±0.32)X 106，(61.88±10.32)，(122.88±14.76)，(5.41±2.81)]顯著低于對照組[(1.760±0.29)×106，(87.00±10.95)，(160.00±24.02)，(9.33

5、±3.08)]，P＜0.01；5.再障患兒骨髓MSC免疫抑制率[(49.78±20.36)％]顯著低于對照組骨髓MSC免疫抑制率[(76.42±8.80)％]，t=-4.56，P＜0.01；6.再障患兒骨髓MSC細胞中TGF-β1 mRNA的表達顯著低于對照，t=-4.14，P＜0.01；HGF mRNA的表達顯著低于對照，t=2.86，P＜0.05；7.再障患兒骨髓MSC培養(yǎng)上清中TGF-β1的濃度[(415.09±108.10)pg

6、/ml]顯著低于對照組骨髓MSC培養(yǎng)上清中的濃度[(630.00±115.85)pg/ml]，t=2.83，P＜0.01；再障患兒骨髓MSC培養(yǎng)上清中HGF的濃度[(340.72±40.44)pg/ml]顯著低于對照組骨髓MSC培養(yǎng)上清中HGF的濃度[(518.12±32.00)pg/ml]，t=-3.02，P＜0.01。 結(jié)論：1.再障患兒骨髓MSC體外造血支持作用較對照組骨髓MSC顯著降低，其發(fā)生機制可能與再障患兒骨髓MSC