白藜蘆醇對豬冷凍精子細胞凋亡及凋亡途徑的影響.pdf

1、低溫冷凍解凍使液氮保存的豬精子細胞發(fā)生嚴重的凋亡，常見的凋亡途徑—死亡受體外源性途徑和線粒體內(nèi)源性途徑均可能在凍后精子中發(fā)生，介導凍融精子發(fā)生凋亡而降低精子質(zhì)量。本實驗在實驗室之前研究基礎上，通過對凋亡途徑相關基因的表達情況研究探索凋亡發(fā)生的可能相關途徑，并探索在冷凍保護劑中添加抗氧化劑白藜蘆醇對冷凍解凍后豬精子細胞凋亡和凋亡途徑的影響。研究結(jié)果：
　　1.冷凍精子TUNEL染色后的凋亡率（80.4％）與新鮮組（9.7%）相比顯著

2、升高（P<0.05）；與新鮮組精子內(nèi) ROS綠色熒光比率相比，冷凍組（58.2%）亦顯著高于新鮮組（P<0.05）；與新鮮組0.926μ mol/L的ATP濃度相比，冷凍組精子的ATP濃度（0.247μ mol/L）則顯著下降（P<0.05）；qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，冷凍組中TNF-α、Fas、Caspase家族、P53和Bax等基因相對表達量升高，其中Fas、P53、TNF-α、caspase8和caspase9等相對表達量升高顯

3、著（P<0.05）；BCL-2、BIRC-5、MnSOD、CuZnSOD和SURVIVN等基因相對表達量降低，其中BIRC-5、MnSOD、SURVIVN降低顯著（P<0.05）。
　　2.向冷凍劑中添加白藜蘆醇工作液，使其在冷凍劑中的終濃度分別為12.5μM,25μM,50μM和100μM，并設置0μ M作為空白對照，比較各組凍融精子活率，頂體和質(zhì)膜完整情況。結(jié)果表明白藜蘆醇終濃度為50μM組的精子活力，質(zhì)膜完整率和頂體完整率均

4、顯著高于其余各添加組（P＜0.05），并顯著高于0μ M組的精子質(zhì)量。精子各指標隨著白藜蘆醇濃度增大而升高，呈現(xiàn)濃度依賴性，但當白藜蘆醇濃度過高（≥100μ M）時精子質(zhì)量顯著下降（P＜0.05）。
　　3.凍融精子經(jīng)Caspase原位熒光染色后，添加白藜蘆醇組的實驗組凍融精子凋亡率為29.0%，與未添加白藜蘆醇組的對照組（86.3%）相比顯著降低（P<0.05）；實驗組58.6%的ROS綠色熒光比率亦顯著低于對照組（88.4%）