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1、延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文單鏈抗體637與人血清白蛋白融合蛋白的真核表達(dá)及功能鑒定姓名:李芳芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):病原生物學(xué)指導(dǎo)教師:孟繁平20070418遼邊尺乍他l憊乍物學(xué)0址幀’譬衍論殳^hslnwlEukaI了oticexpressionandfhnctionaI£haracterizationoffusionproteinofsingIechainVariabIefragment637andhumanscrumaIbuminAb
2、stractobjective:ToexpresstheconslructedrecombjnantgeneofsingIechainvariablefragment(ScFV)637ofanljbodyagainstthemainimmunogenicregion(MIR)ofacetyIchoIinereceptor(AChR)inmyastheniagraVis(MG)andhumanserumaIbuminARerthemole
3、cuIarweightoffusionproteinwasconnmed,theafnnityoffusionpmteintoAChRinhumanmfercos扭lsmusclesurasdetectedMethods:A療erresuscicatingtheJP『c廳脅,搿sm,‘捃GS1l5strainswhichbearsrecombinantgeneepressionvectorthestrongresistanlG418of
4、mulljpIecopiestransfomlantswereseIectedAsinglecolonywasincubatedjnYPDBMGYandBMMYcuIturemediatoinduceexpressioninturnWithininducingexpression3days,lOO%methan01waSaddedtoBMMYevery24hourslOmakethefinaIconcentrationOf1%intot
5、aIculturemediumAftercentrifugingIhesupernacantofexpressionmediumat14000gatroomtemperaturethefusionpro【eininsupernatantwasdetectedprimarilybydO‘blotThemolecuJarweiglltoffusionproteinwasanal,’zedbyCoomassiestainedsodiumdod
6、ecylsult’atepolyacryIamidegeIelectrophoresis(SDSPAGE)TheafnnityoffusionproteintoAChRwasdetectedusingindrectimmunonuorcscencetechnologyResuIts:ThefLlsionproteinwassecrete4inthesupernatanIofexpressionculturemediumItsmolecL
7、IIarwei址11I、、asahoLII974KDTherewas門uorescencebetweenthehumanintercostalsnluscIeceIIsConcIusion:Thefusionpfoeein、vasexpressedfiom尸,f^脅,(“,D,’時(shí)GSlI5successfLlllyanditcouldbindtoIheAChRinhumanintercostalsmLIscIesKeywords:si
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