涎腺腺樣囊性癌基因治療的實驗研究.pdf

1、目的：涎腺腺樣囊性癌(ACC)，是一種常見的涎腺惡性腫瘤。其惡性程度高，侵襲性強，易復(fù)發(fā)、易早期轉(zhuǎn)移。且對放療、化療不敏感，手術(shù)治療難以根除。因此，尋求有效的輔助性治療手段非常必要。腫瘤基因治療已成為最引人矚目的研究領(lǐng)域，是繼手術(shù)、放療、化療、免疫治療之后的第5種治療模式。而自殺基因療法是目前有效治療腫瘤中最有前景的基因治療策略之一。本研究目的在于探討腺病毒載體介導(dǎo)的單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)與免疫因子白細(xì)胞介素-2(IL-2

2、)聯(lián)合應(yīng)用對涎腺腺樣囊性癌的抑制和殺傷作用?？赏麨樵撃[瘤基因治療的臨床研究提供可靠的理論依據(jù)和實驗室數(shù)據(jù)。 材料與方法： 1.材料:(1)實驗材料：人涎腺腺樣囊性癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系(ACC-M)。(2)藥品：腺病毒介導(dǎo)的單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)，腺病毒介導(dǎo)白細(xì)胞介素-2(IL-2)，丙氧鳥苷(GCV)(3)實驗動物：20只SPF級雌性Balb/c裸小鼠，4～5周齡。 2.方法：(1)動物模型建立：ACC-

3、M細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640含胎牛血清和雙抗的培養(yǎng)液中，37℃恒溫孵育，收集細(xì)胞并調(diào)整為2×107/ml的細(xì)胞懸液。將ACC-M細(xì)胞懸液接種于裸鼠皮下，每只注射左前背部和右后背部2點，每點0.2ml，待移植瘤直徑達(dá)約1.0cm，隨機分組。(2)分組與給藥：共分4組，每組5只。均采取瘤體內(nèi)注射。A組空白對照組，每移植瘤注射與實驗組等量生理鹽水。B組為空病毒組，每瘤注射空病毒(EGFP)5×108pFU。C組為HSV-tk組，每瘤注射tk5

4、×108PFU。D組為聯(lián)合基因治療組，每瘤注射tk(5×108PFU)+IL-2(5×108PFU)。48小時以后，對B、C、D組裸鼠每日腹腔注射GCV，100mg/kg/日，2次/日，連續(xù)10天。A組每日腹腔注射等量生理鹽水。觀察裸鼠腫瘤生長情況。在實驗開始的第10天、第13天、第16天、第19天每3天測量腫瘤長、寬、高，并以V=(6/π)長度×寬度×高度(長寬之間必成直角)計算腫瘤體積。(3)標(biāo)本采集與檢測：實驗第20天斷頸處死裸鼠