miRNA聯(lián)合金納米籠對(duì)肝癌基因治療的初步研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　通過(guò)聯(lián)合基因治療和金納米籠的熱療，觀(guān)察其對(duì)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑制，同時(shí)探究基因聯(lián)合熱療可能的分子生物學(xué)機(jī)制，為以后對(duì)腫瘤采用多機(jī)制聯(lián)合治療的策略開(kāi)闊視野和提供有價(jià)值的理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　本實(shí)驗(yàn)使用人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，以肝癌細(xì)胞高表達(dá)的microRNA-181為靶標(biāo)，設(shè)計(jì)合成了和其完全互補(bǔ)的4條由23個(gè)堿基組成的anti-miR-181a、anti-miR-181b、an

2、ti-mi-181c和anti-mi-181d。Lipofectamin TM2000為轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，SRB法觀(guān)察不同anti-miR-181序列對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用;通過(guò)PI單染法檢測(cè)篩選出的有效序列anti-miR-181b對(duì)細(xì)胞周期的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)anti-miR-181b對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用;以篩選的有效序列a

3、nti-miR-181b作為治療藥物，相變材料1-14醇和anti-miR-181b混合均勻，DSC分析14醇對(duì)anti-miR-181b的影響，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)14醇和anti-miR-181b的最佳體積比，在體外通過(guò)加熱或者超聲研究混合物的穩(wěn)定性和釋藥特性，同時(shí)觀(guān)察加熱對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)情況的影響以及anti-miR-181b在加熱狀態(tài)下的活性;篩選的PCM-anti-miR-181b混合物包封于金納米籠中，根據(jù)相關(guān)公式計(jì)算包封率和十四醇

4、所占金納米籠的體積，激光加熱使anti-miR-181b釋放，采用SRB法觀(guān)察載藥金納米籠、陰性對(duì)照、空白金納米籠對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　本實(shí)驗(yàn)合成了4條anti-miR-181序列，從中成功篩選出一條抑制效果較好的有效序列anti-miR-181b;anti-miR-181b轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞SMMC-7721后，能抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，使細(xì)胞周期發(fā)生阻滯，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，具有良好的體外抗肝癌作用，為肝癌的基因治

5、療提供了扎實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ);PCM-anti-miR-181b最佳混合比為2∶1，DSC分析1-14醇的加入不會(huì)使anti-miR-181b的性質(zhì)發(fā)生改變，混合物于4℃放置一個(gè)月性質(zhì)穩(wěn)定，加熱對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)并無(wú)影響，同時(shí)不會(huì)影響anti-miR-181b的活性，可以用于熱療;合成的金納米籠性質(zhì)穩(wěn)定可用于載藥，整個(gè)金納米籠包裹了53％的1-14醇，每個(gè)金納米籠中載有的anti-miR-181b摩爾數(shù)為:3.06×10-25mol/cage，溫度加