2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:以As2O3、Canstatin及二者聯(lián)合方案分別干預(yù)三維培養(yǎng)的肝癌HepG2細(xì)胞,觀察各干預(yù)因素對(duì)血管生成擬態(tài)(VM)形成能力(VM數(shù)量、長(zhǎng)度及面積)的影響,探討其影響機(jī)制,為抗肝癌血管形成提供新策略和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
  方法:⑴CCK-8法確定As2O3(1、5、10、15、20μmol/L)對(duì)HepG2細(xì)胞的最適作用劑量;⑵RT-PCR法鑒定重組腺病毒;⑶流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)(MOI=10、20、40、60、80)的

2、腺病毒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞(24h、48h、72h)的轉(zhuǎn)染率,western-blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞Canstatin和Caspase-3蛋白的表達(dá);⑷體外基質(zhì)膠三維培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,PAS染色法鑒定VM;⑸不同干預(yù)因素對(duì)HepG2細(xì)胞形成VM的影響,實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組、As2O3組(1/2IC50、IC50、2IC50)、Canstatin組、As2O3(1/2IC50、IC50)與Canstatin聯(lián)合組,各因素干預(yù)體外培養(yǎng)細(xì)胞12h后

3、種膠,分別于種膠0.5h、2h、12h、24h、48h、72h倒置顯微鏡觀察下拍照,記錄測(cè)量VM(環(huán)狀結(jié)構(gòu))的數(shù)量、長(zhǎng)度及面積。⑹RT-PCR實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞中VE-cadherin、MMP-2、Caspase-3、PCNA的表達(dá);⑺Western-blot檢測(cè)各因素干預(yù)體外培養(yǎng)細(xì)胞12h后VE-cadherin、MMP-2、Caspase-3、PCNA的表達(dá)變化。
  結(jié)果:①經(jīng)SPSS17.0軟件計(jì)算得出As2O3作用HepG2細(xì)

4、胞72h的半數(shù)抑制濃度IC50(10μmol/L)為后續(xù)實(shí)驗(yàn)最適用藥劑量;②PCR產(chǎn)物測(cè)序序列識(shí)別為人Canstatin基因;③確定2次、48h,MOI=80為后續(xù)實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染方式。Western-blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中Canstatin的表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性,Caspase-3的表達(dá)與對(duì)照組沒(méi)有差異;④三維培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞種膠2h后開(kāi)始變形、延伸并相互連接,12h時(shí)相鄰的細(xì)胞相互聚集成明顯的條索樣結(jié)構(gòu),72h時(shí)邊緣逐漸光滑,細(xì)胞開(kāi)始向上堆積生長(zhǎng),PA

5、S染色后HepG2細(xì)胞形成的環(huán)狀條索樣結(jié)構(gòu)被染成紫紅色;⑤不同方案處理細(xì)胞三維培養(yǎng)72h后,倒置顯微鏡50倍視野下拍照,圖片應(yīng)用IPP軟件計(jì)算VM的長(zhǎng)度、數(shù)量和面積,統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示,VM的長(zhǎng)度、數(shù)量和面積,在1/2IC50組分別為4.90±0.91,22.00±9.17,0.177±0.013,IC50組分別為2.70±1.04,2.00±1.41,0.079±0.006,與對(duì)照組8.34±0.91,48.67±8.08,0.309

6、±0.017比較P<0.01,1/2IC50組與IC50組比較P<0.05;Canstatin與As2O3聯(lián)合組能夠抑制VM,與對(duì)照組比較P<0.05,但聯(lián)合組與As2O3組比較P>0.05;Canstatin組與對(duì)照組比較P>0.05;⑥PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果顯示,細(xì)胞中存在VE-cadherin、MMP-2、Caspase-3、PCNA的表達(dá);⑦western-blot結(jié)果顯示,1/2IC50組VE-cadherin相對(duì)表達(dá)量為1.79

7、±0.13,IC50組為0.62±0.06,與對(duì)照組2.56±0.13比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05,1/2IC50組與IC50組MMP-2的相對(duì)表達(dá)量1.96±0.09、1.10±0.03與對(duì)照組2.79±0.13相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05,而凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和增殖相關(guān)蛋白PCNA的相對(duì)表達(dá)沒(méi)有差異P>0.05,Canstatin組各蛋白的相對(duì)表達(dá)與對(duì)照組相比P>0.05,聯(lián)合組能抑制VE-cadherin、MM

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