Mir-486-5p調控鼻咽癌HNE1細胞增殖及遷移的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]
　　本論文旨在重點闡述miR-486-5p在鼻咽癌HNE1細胞增殖及細胞遷移中的作用及初步探討其機制，為發(fā)掘鼻咽癌治療新靶點提供實驗基礎。
　　[方法]
　　利用脂質體轉染技術將miR-486-5p轉染至人鼻咽癌細胞株HNE1中，實時定量PCR法檢測轉染后miR-486-5p表達水平。CCK-8法檢測過表達miR-486-5p對鼻咽癌細胞增殖活性的影響。平板克隆方法檢測miR-486-5p對鼻咽癌細胞克隆形成

2、的能力。流式細胞術分析miR-486-5p對鼻咽癌細胞周期分布的影響。劃痕試驗檢測miR-486-5p對鼻咽癌細胞的遷移能力。用Western blot法檢測細胞周期和遷移相關蛋白的表達。
　　[結果]
　　(1)實時定量PCR結果證實miR-486-5p在鼻咽癌細胞系中低表達。與正常細胞NP69相比，在CNE2細胞是其(0.036±0.008)倍，在HNE1細胞是其(0.010±0.001)倍，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0

3、.05)。miR-486-5p mimics轉染的最佳條件是轉染終濃度為40nmol/L，轉染時間為48h。
　　(2)細胞生長曲線、平板克隆形成、流式細胞儀測定周期和Western blot結果表明，miR-486-5p通過下調細胞周期相關蛋白CDK4和Cyclin D1的表達，上調p21Cip1、p27Kip1的表達，使鼻咽癌細胞阻滯在細胞周期G1期，抑制鼻咽癌細胞的增殖能力。轉染組細胞在轉染24 h和48 h后G1期細胞比例

4、明顯增多，分別由(37.22±1.53)％和(67.05±1.20)％增加至(49.70±0.84)％和(79.61±1.26)％，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　(3)細胞劃痕實驗及Western blot結果表明，miR-486-5p通過下調遷移相關蛋白MMP2及MMP9的表達來抑制鼻咽癌細胞的遷移能力，MMP2蛋白在48h及72h分別降至(0.66±0.03)倍和(0.74±0.02)倍;MMP9蛋白在48h及7

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