Urocortin抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子改善糖尿病腎病.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病最常見、最嚴(yán)重的慢性微血管并發(fā)癥之一，是糖尿病患者的主要死亡原因。因此，積極尋求有效措施防治糖尿病腎病具有重要意義。臨床上，糖尿病腎病主要表現(xiàn)為蛋白尿、高血壓、進(jìn)行性腎功能損害。腎小球系膜細(xì)胞(GMCs)增殖、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)堆積引起的系膜擴(kuò)張是該病發(fā)展過程中的一個(gè)重要病理改變。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)由于其強(qiáng)大的促血管通透性以及促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，改變ECM，促血管生成等功能介導(dǎo)了糖尿病腎病蛋白尿的產(chǎn)生以及系

2、膜擴(kuò)張等重要病理變化，在糖尿病腎病發(fā)病中的作用越來越受到人們的關(guān)注。 Urocortin(UCN)是促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)肽類家族中的新成員，自被發(fā)現(xiàn)以來，其在心血管系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮的多方面重要作用被不斷證實(shí)，并且UCN能顯著減少大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)VEGF的釋放，抑制VSMCs增殖，抑制毛細(xì)血管形成。本實(shí)驗(yàn)室在體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UCN通過下調(diào)肝癌組織VEGF水平抑制腫瘤生長(zhǎng)和新生血管的生成。 本研究探

3、討UCN對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟組織VEGF表達(dá)的影響，進(jìn)而探索UCN對(duì)糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的影響及其作用機(jī)制。采用小劑量多次注射鏈脲菌素(STZ)聯(lián)合弗氏完全佐劑(CFA)同時(shí)輔以高脂飲食的方法建立大鼠糖尿病腎病動(dòng)物模型。自實(shí)驗(yàn)開始第7周給藥，連續(xù)8周每日給予大鼠腹腔注射UCN(6 μg·kg-1)或UCN(6 μg·kg-1)+astressin(30 μg·kg-1)，檢測(cè)大鼠血糖、體重變化，給藥結(jié)束后檢測(cè)相關(guān)的血清生化、尿液指標(biāo)，通過

4、H-E染色和PAS染色評(píng)價(jià)腎臟病變程度，應(yīng)用RT-PCR方法半定量檢測(cè)腎臟組織VEGF mRNA表達(dá)情況，利用免疫組化技術(shù)觀察腎小球VEGF、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，UCN可以明顯降低模型動(dòng)物的腎臟重量，但是對(duì)模型動(dòng)物的血糖、體重、腎指數(shù)均無明顯影響；UCN能顯著降低模型動(dòng)物血清中尿素氮、肌酐濃度及丙二醛(MDA)含量，提高肌酐清除率和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性；降低模型動(dòng)物24h尿量、尿蛋白、尿微量白蛋

5、白排出量，增加尿尿素氮、尿肌酐排出量；減輕腎臟系膜區(qū)增寬，基質(zhì)增多等病理變化；抑制模型動(dòng)物腎小球VEGF、TGF-β1的過度表達(dá)。這些作用絕大多數(shù)受CRH受體(CRHR)拮抗劑astressin的影響。本文離體部分用TGF-β1(2ng/ml)刺激GMCs分泌VEGF，同時(shí)給予不同濃度的UCN，孵育12h。采用Elisa法定量檢測(cè)細(xì)胞上清液中VEGF的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，UCN可以濃度依賴性地抑制TGF-β1誘導(dǎo)的VEGF的分泌，5x10-