乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移檢測(cè)及腫瘤特異性CTLs細(xì)胞的免疫治療.pdf

1、目的：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增高。影響預(yù)后的關(guān)鍵因素是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，也是治療失敗的根本原因。雖然采取了以手術(shù)為主的綜合治療措施，但遠(yuǎn)期生存率沒有明顯提高。多項(xiàng)研究表明，乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移是臨床遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶的先兆，可作為獨(dú)立因素判斷預(yù)后，在指導(dǎo)治療、評(píng)價(jià)療效及術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)上有重要意義。提高乳腺癌患者的生存率、延長(zhǎng)生存期，應(yīng)對(duì)骨髓微轉(zhuǎn)移采取治療。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)乳腺癌患者骨髓微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)及應(yīng)用腫瘤特異性CTLs細(xì)胞對(duì)微轉(zhuǎn)移陽性

2、患者進(jìn)行治療，探討微轉(zhuǎn)移發(fā)生規(guī)律以及免疫細(xì)胞過繼治療對(duì)微轉(zhuǎn)移的治療作用，為乳腺癌的預(yù)后判斷及制定綜合治療方案提供幫助。 方法：選取我院2007年3月至12月期間收治的可手術(shù)乳腺癌病例82例，并經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。研究對(duì)象均為女性，年齡27～80歲，中位年齡44.8歲。術(shù)前均未行放、化療及內(nèi)分泌治療。按照國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC，乳腺癌，2002)腫瘤TNM臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期8例、Ⅱ期51例、Ⅲ期23例。另設(shè)陰性對(duì)照10例。術(shù)前1-3天抽

3、取骨髓，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，聯(lián)合檢測(cè)骨髓有核細(xì)胞中CK18、CK19的陽性細(xì)胞表達(dá)率。將23例術(shù)前骨髓微轉(zhuǎn)移陽性患者分為二組，治療組17例，術(shù)后應(yīng)用特異性CTL細(xì)胞免疫過繼治療。免疫治療結(jié)束后再接受其余綜合治療。對(duì)照組6例，術(shù)后不接受特異性CTL細(xì)胞免疫過繼治療。其余治療方式及應(yīng)用時(shí)間與第一組相同。免疫治療組術(shù)中取腋下淋巴結(jié)及外周血，術(shù)后體外誘導(dǎo)培養(yǎng)特異性CTL細(xì)胞，于術(shù)后10-14天回輸，觀察特異性CTL細(xì)胞對(duì)乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移的療效。

4、 結(jié)果： 1.82例乳腺癌患者骨髓標(biāo)本中，23例經(jīng)FCM檢測(cè)到CK18+、CK19+/CD45-細(xì)胞，骨髓微轉(zhuǎn)移的陽性檢出率為28.05％。 2.乳腺癌患者的骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率隨著原發(fā)腫瘤的增大而增高，腫瘤直徑≤2cm組、2～5cm組及>5cm組的骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率分別為7.69％(1/13)、14.58(7/48)％、71.43％(15/21)，三組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P=0.0007。 3.乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率

5、隨著臨床病理分期增高而增加。臨床I期組骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率12.50％(1/8)，Ⅱ期組17.65％(9/51)，Ⅲ期56.52％(13/23)，三組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P=0.004。 4.乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率隨著組織學(xué)分級(jí)增加而增高。組織學(xué)分化Ⅲ級(jí)組骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率為68.42％(13/19)，明顯高于Ⅱ級(jí)組17.65％(9/51)及Ⅰ級(jí)組8.33％(1/12)，三組間比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P=0.003。 5.乳腺癌患者的

6、骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率與患者的年齡、月經(jīng)狀況無關(guān)，P>0.05。 6.乳腺癌患者的骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率隨腫瘤組織ER、PR蛋白表達(dá)的增強(qiáng)而降低，ER、PR陽性組骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率分別為13.33％(4/30)、10.34％(3/29)，明顯低于ER、PR陰性組36.54％(19/54)、37.74％(20/53)，P<0.05。乳腺癌患者的骨髓微轉(zhuǎn)移與腫瘤組織C-erbB-2的表達(dá)無關(guān)(P>0.05)。 7.將23例骨髓微轉(zhuǎn)移陽性

7、患者分為二組，治療組17例均順利應(yīng)用特異性腫瘤CTLs細(xì)胞過繼免疫治療，其中只有2例患者出現(xiàn)輕度發(fā)熱、乏力或嗜睡，其他患者未有不適癥狀。對(duì)照組6例未接受治療。治療組、對(duì)照組于術(shù)后20天左右再次抽取骨髓，做微轉(zhuǎn)移檢測(cè)，并與術(shù)前對(duì)照，判斷療效。治療組17例患者中有14例，在治療后的微轉(zhuǎn)移檢測(cè)中呈陰性，過繼免疫治療后轉(zhuǎn)陰率為82.4％。對(duì)照組6例中，只有1例術(shù)后微轉(zhuǎn)移檢測(cè)為陰性，術(shù)后轉(zhuǎn)陰率只有16.7％。差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00028)

8、。 結(jié)論 1.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)聯(lián)合CK18、CK19檢測(cè)乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移的陽性率為28.05％。 2.本組研究顯示，乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移的陽性率隨著臨床分期的增加而增高，臨床分期與原發(fā)腫瘤體積、腋下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素直接相關(guān)，提示隨著腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力的增高，腫瘤細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)處播散的機(jī)會(huì)增加。當(dāng)處于臨床Ⅲ期時(shí)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的機(jī)率明顯增高。 3.乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率隨組織學(xué)分級(jí)增加而升高，說明分化程度低的腫瘤細(xì)胞具有更

9、強(qiáng)的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力，對(duì)這部分病人應(yīng)加強(qiáng)化療等綜合性治療，密切關(guān)注全身轉(zhuǎn)移情況。 4.乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移陽性率隨ER、PR蛋白表達(dá)增強(qiáng)而降低，說明分化愈差的腫瘤細(xì)胞，ER、PR丟失愈多，可能具有更強(qiáng)的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力。 5.本研究未發(fā)現(xiàn)乳腺癌骨髓微轉(zhuǎn)移與患者的年齡、月經(jīng)狀況、病理類型及腫瘤組織中C-erbB-2的表達(dá)有關(guān)。 6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還中發(fā)現(xiàn)，有近12.50％的臨床I期患者，骨髓微轉(zhuǎn)移陽性。提示乳腺癌屬全