新型光敏劑二氫卟吩e6-C15單甲酯光譜性質(zhì)及體內(nèi)代謝的初步研究.pdf

1、腫瘤光動(dòng)力治療新藥二氫卟吩e6-C15單甲酯系蠶砂葉綠素經(jīng)酸、堿降解后分離制備得到的單體二氫卟吩e6衍生物，具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、腫瘤/正常組織分布比高、光敏化力和腫瘤光生物活性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是一種有前途的卟啉類光敏劑，對(duì)其開展臨床前基礎(chǔ)性研究具有重要意義。本課題主要考察了二氫卟吩e6-C15單甲酯的光譜學(xué)特性，以此為基礎(chǔ)建立了二氫卟吩e6-C15單甲酯在生物樣品中含量測(cè)定的熒光分析法，研究了二氫卟吩e6-C15單甲酯在SD大鼠體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)

2、特征。
　　一、二氫卟吩e6-C15單甲酯熒光光譜特性的研究。
　　本試驗(yàn)開展了二氫卟吩e6-C15單甲酯在不同溶劑體系中熒光光譜特性的研究。首先比較分析了二氫卟吩e6-C15單甲酯在甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、磷酸鹽緩沖液和水6種不同溶劑體系中的熒光光譜特征，進(jìn)一步考察了有機(jī)溶劑含量和溶液pH對(duì)二氫卟吩e6-C15單甲酯發(fā)射波長(zhǎng)和熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明pH7.2磷酸鹽緩沖液-乙腈（3:7）混合溶液中二氫卟吩e6-C15單甲酯

3、熒光強(qiáng)度大、性質(zhì)穩(wěn)定；二氫卟吩e6-C15單甲酯熒光分析法檢測(cè)的最佳激發(fā)波長(zhǎng)為398.00nm或498.00nm，最佳發(fā)射波長(zhǎng)為664.05nm。
　　二、血漿生物樣品中二氫卟吩e6-C15單甲酯定量分析方法的建立與確證。
　　本試驗(yàn)以二氫卟吩e6-C15單甲酯的熒光光譜特性為基礎(chǔ)，首次建立了簡(jiǎn)便、快速、可靠的檢測(cè)血漿生物樣品中二氫卟吩e6-C15單甲酯的熒光分析法。采用pH7.2磷酸鹽緩沖液-乙腈（3:7）混合溶液沉淀SD

4、大鼠血漿蛋白，選擇498.00 nm和664.05 nm作為激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，建立的SD大鼠血漿樣品中二氫卟吩e6-C15單甲酯熒光分析法專屬性好，靈敏度高，血漿內(nèi)源性物質(zhì)及其它物質(zhì)均不干擾樣品的測(cè)定。二氫卟吩 e6-C15單甲酯血藥濃度測(cè)定的線性范圍為0.50~50.00μg·mL-1，最低定量限為0.50μg·mL-1，低、中、高QC樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5.68％，相對(duì)回收率大于93.88%。血漿生物樣品經(jīng)蛋白沉淀處理

5、后的提取回收率大于90.65%，高濃度樣品經(jīng)稀釋后不影響其實(shí)際血藥濃度的測(cè)定結(jié)果。二氫卟吩e6-C15單甲酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液15天（避光、密封、低溫-20℃）放置穩(wěn)定性和血漿樣品室溫2h放置穩(wěn)定性、預(yù)處理后2h穩(wěn)定性、反復(fù)三次凍融穩(wěn)定性、15天（避光、密封、低溫-80℃）放置穩(wěn)定性考察結(jié)果表明：在一定貯存條件下，二氫卟吩 e6-C15單甲酯貯備液和血漿樣品短期和長(zhǎng)期穩(wěn)定性均良好。
　　三、二氫卟吩e6-C15單甲酯在SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)

6、力學(xué)研究。
　　本試驗(yàn)選用18只健康、成年SD大鼠，體重200±20g，雌雄各半，隨機(jī)分成三組進(jìn)行試驗(yàn)，分別于尾靜脈單劑量注射給藥1 mg·Kg-1，2 mg·Kg-1，4 mg·Kg-1二氫卟吩e6-C15單甲酯注射劑后按既定時(shí)間點(diǎn)從眼眶靜脈叢采血。采用評(píng)價(jià)的熒光分析法測(cè)定血漿中二氫卟吩e6-C15單甲酯的濃度，結(jié)果由BAPP2.0軟件進(jìn)行處理，經(jīng)非房室模型法（統(tǒng)計(jì)矩法）估算相應(yīng)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SD大

7、鼠單劑量靜注1、2、4 mg·Kg-1的二氫卟吩e6-C15單甲酯后，二氫卟吩e6-C15單甲酯的藥代動(dòng)力學(xué)藥時(shí)曲線末端相消除半衰期(t1/2)分別為51.93±23.28h、35.54±6.97h、28.67±8.93h；平均駐留時(shí)間(MRT)分別為65.38±31.73h、43.00±9.04h、34.71±11.58h；初始濃度(C0)分別為16.52±2.13μg·mL-1、32.89±5.59μg·mL-1和62.34±7.8

8、3μg·mL-1；藥時(shí)曲線下面積(AUC0-τ)分別為153.56±38.10μg?h·mL-1、281.42±9.59μg?h·mL-1、460.54±37.65μg?h·mL-1；藥時(shí)曲線下面積(AUC0?∞)分別為240.88±112.23μg?h·mL-1、355.23±26.62μg?h·mL-1和546.49±83.39μg?h·mL-1；總清除率(CL)分別為4.87±1.96 mL·h-1·Kg-1、5.66±0.48m

9、L·h-1·Kg-1和7.48±1.26 mL·h-1·Kg-1；表觀分布容積(Vd)分別為273.99±79.33mL·Kg-1、240.27±38.13mL·Kg-1和248.21±54.16mL·Kg-1。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)線性分析的結(jié)果為三個(gè)劑量組初始濃度（C0），AUC0-τ符合線性藥代動(dòng)力學(xué)特征，隨給藥劑量成線性變化。
　　四、SD大鼠多劑量給藥二氫卟吩e6-C15單甲酯后體內(nèi)蓄積效應(yīng)研究。
　　本試驗(yàn)采用6只健康、

10、成年SD大鼠，體重200±20g，雌雄各半，進(jìn)行二氫卟吩e6-C15單甲酯在SD大鼠體內(nèi)多劑量給藥的藥代動(dòng)力學(xué)研究。受試SD大鼠分別于每日晨間同一時(shí)刻尾靜脈注射給藥2mg·Kg-1二氫卟吩 e6-C15單甲酯注射劑，連續(xù)7日。從第五日開始給藥前采集血樣，第7日給藥后按單劑量試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)采集血樣。熒光分析法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)SD大鼠體內(nèi)二氫卟吩e6-C15單甲酯的血藥濃度，考察二氫卟吩 e6-C15單甲酯多劑量給藥在體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)過程、峰(Cmax

11、)－谷(Cmin)波動(dòng)系數(shù)DF、穩(wěn)態(tài)藥代動(dòng)力學(xué)特征以及可能產(chǎn)生的蓄積效應(yīng)等。
　　試驗(yàn)結(jié)果表明，從第五日起SD大鼠體內(nèi)二氫卟吩e6-C15單甲酯的血藥濃度已基本上達(dá)到穩(wěn)態(tài)，即血藥濃度不再隨給藥次數(shù)增加而增加。多劑量靜注給藥二氫卟吩 e6-C15單甲酯2mg·Kg-1后 SD大鼠體內(nèi)穩(wěn)態(tài)藥代動(dòng)力學(xué)過程初始峰濃度（Cmax）、谷濃度（Cmin）、坪濃度（Cav）和AUCss分別為：36.68±4.61μg·mL-1、0.85±0.18